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原代細胞VS細胞系：

用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。

?小鼠肺小動脈平滑肌細胞

商品屬性：

細胞簡介：

小鼠肺小動脈平滑肌分離自肺小動脈組織；小動脈（smallartery），管徑在0.3-1mm之間，小動脈包括粗細不等的幾級分支，也屬肌性動脈。較大的小動脈，內(nèi)膜有明顯的內(nèi)彈性膜，中膜有幾層平滑肌，外膜厚度與中膜相近，一般沒有外彈性膜。小動脈是決定周圍循環(huán)阻力大小的主要因素，也是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“總開關(guān)"。典型的小動脈，其管壁的厚度與管徑相比約為1∶2。中膜的肌層相對比其他動脈為厚，當平滑肌在神經(jīng)支配下強力收縮時，其管腔可以閉塞，而使血液不能流入它所分布的毛細血管內(nèi)，從而增加了周圍血液循環(huán)的阻力。如果有許多小動脈同時收縮，可使血壓顯著上升。反之，當小動脈的平滑肌舒張時，則可使大量的血液流入毛細血管，外周阻力明顯下降，血壓降低。終末小動脈（terminal arteri-ole）的口徑為20-30μm；后小動脈（metar-teriole），又稱毛細血管前小動脈（precapil-lary arteriole）的口徑為12-15μm。管壁內(nèi)均有較稀疏的平滑肌，在毛細血管前小動脈分支的起始部分，管壁平滑肌成分增厚，叫做毛細血管前括約肌（precapillary sphinc-ter），其收縮或舒張，可調(diào)節(jié)真毛細血管的血流量，是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“分開關(guān)"。

方法簡介：

實驗室分離的小鼠肺小動脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的小鼠肺小動脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機"而繼續(xù)傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當50代以后又會出現(xiàn)“危機"，這時有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。

也有認為細胞系指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系，因此，細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物的單一細胞稱為細胞株。

細胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

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EPHA3 Protein Mouse 重組小鼠 EphA3 蛋白 (aa 569-984)

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原代細胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。