上海莼試生物技術(shù)有限公司
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上海市
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產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 組織來源 | 毛囊 |
---|---|---|---|
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 梭形、多角形 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
商品屬性:
組織來源 | 毛囊 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
產(chǎn)品貨號 | CS-X3580 | 生長特性 | 貼壁 |
細(xì)胞簡介:
小鼠毛囊干分離自皮膚毛囊組織;毛囊是表皮細(xì)胞連續(xù)形成的袋樣上皮。其基底是真皮凹進(jìn)的真皮毛乳頭,中心是一根毛發(fā),立毛肌的一側(cè)斜附在毛囊壁上,附著點(diǎn)的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸,毛囊在皮膚表面的開口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下組織中,毛囊向下伸入真皮約有一厘米深度,它是由包繞毛發(fā)與表皮相連的上皮鞘,以及皮脂腺和立毛肌所組成的一個(gè)結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的器官附件組織。毛囊干細(xì)胞是在毛囊外根鞘隆突部中的一種細(xì)胞。毛囊干細(xì)胞屬于成體干細(xì)胞,在體內(nèi)處于靜止?fàn)顟B(tài),在體外培養(yǎng)作用下表現(xiàn)出驚人的增殖能力。研究發(fā)現(xiàn),毛囊干細(xì)胞具有多向分化潛能,它可以分化成表皮、毛囊、皮脂腺,參與皮膚創(chuàng)傷愈合的過程。毛囊干細(xì)胞和其它成體干細(xì)胞一樣,具有慢周期性、未分化性、自我更新和體外增殖能力強(qiáng)等特點(diǎn)。毛囊干細(xì)胞分化經(jīng)毛囊干細(xì)胞(hair follicle stem cells,FSC)、短暫增殖細(xì)胞(transit amplifying cells,TAC)有絲分裂后分化細(xì)胞(postmitotic differentiating cells,PDC)三個(gè)階段。毛囊干細(xì)胞在光鏡下呈立方形,細(xì)胞體積小,核漿比率大,表面光滑,皺褶少,又被稱為非鋸齒形細(xì)胞,細(xì)胞體積的增大與增殖能力呈負(fù)相關(guān)。超微結(jié)構(gòu)顯示細(xì)胞表面有少許微絨毛,細(xì)胞核存在許多卷曲,染色質(zhì)彌散分布,這些形態(tài)特征均表現(xiàn)出原始細(xì)胞的特性。
方法簡介:
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠毛囊干經(jīng)CD34免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
質(zhì)量檢測:
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠毛囊干采用膠原酶 - 聯(lián)合消化制備而來,細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):梭形、多角形
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
原代細(xì)胞VS細(xì)胞系:
用酶或機(jī)械方法直接從人或動物組織中分離出來的細(xì)胞。嚴(yán)格來說,從機(jī)體分離出來到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞,絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長短有關(guān)),再加上取材,成本等因素,通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。
原代細(xì)胞一般傳至10代左右,大部分細(xì)胞衰老死亡,但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去,存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代,叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會出現(xiàn)“危機(jī)",這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn),從而可能無限制地傳代下去,稱為細(xì)胞系。
也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來的有限細(xì)胞系、無限細(xì)胞系,因此,細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞,廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法,從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。
細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價(jià)格便宜、無限傳代等優(yōu)點(diǎn),也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。
原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟:
1、準(zhǔn)備:取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2、布局:點(diǎn)燃酒精燈,安裝吸管帽。
3、處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2-3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。
5、消化:或用恒溫水浴,或置于37℃溫箱消化均可,消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次,如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨?。消化時(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。
6、分離:在消化過程中見消化液發(fā)混濁時(shí),可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察,如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞,立即終止消化,隨即通過適宜不銹鋼篩,濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速(500-1000轉(zhuǎn)/分)離心消化液5分鐘,吸出上清,加入適量含有血清的培養(yǎng)液。
7、計(jì)數(shù):用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大,再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后,分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細(xì)胞來說,pH要求在7.2-7.4范圍,培養(yǎng)液呈微紅色,如顏色偏黃,說明液體變酸,可用NaHCO3調(diào)整。
8、培養(yǎng):置于37℃溫箱培養(yǎng),如用CO2溫箱培養(yǎng),瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞,紗布塞易生霉菌,每次換液時(shí)需要換新塞。
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