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原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機(jī)械方法直接從人或動(dòng)物組織中分離出來(lái)的細(xì)胞。嚴(yán)格來(lái)說(shuō)，從機(jī)體分離出來(lái)到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長(zhǎng)短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會(huì)把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

?小鼠氣管平滑肌細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠氣管平滑肌分離自氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體（相當(dāng)胸骨角平面）交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個(gè)半環(huán)狀軟骨構(gòu)成，有彈性，軟骨為“C"字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來(lái)，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開(kāi)狀態(tài)。管腔襯以粘膜，表面覆蓋纖毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒，纖毛不斷向咽部擺動(dòng)將粘液與灰塵排出，以凈化吸入的氣體。氣管平滑肌是氣管的重要結(jié)構(gòu)組成之一，在機(jī)體的正常生理過(guò)程中發(fā)揮著重要作用；能夠保持氣道張力，維持氣道管狀形態(tài)，從而有利于氣體流通，保持肺部通氣。氣管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。氣管平滑肌細(xì)胞的異常是呼吸道疾病的重要病理特征之一，其增生、肥大是氣道重塑的關(guān)鍵。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠氣管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠氣管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合組織貼塊法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過(guò)“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)"，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無(wú)限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長(zhǎng)期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來(lái)的有限細(xì)胞系、無(wú)限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價(jià)格便宜、無(wú)限傳代等優(yōu)點(diǎn)，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯(cuò)誤鑒定及交叉污染的問(wèn)題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat macrophage inflammatory protein 3 beta (MIP-3 beta /ELC/CCL19) ELISA Kit 大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISA試劑盒

Humanai-apolipoproteinA1aibody,ApoA1ELISAKit 人抗載脂蛋白抗體A1(ApoA1)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanAldolase,ALDELISA試劑盒人縮酶(ALD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物S腺苷同型半胱核苷酶(AdoHcynucleosidase)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Mouse6-keto-prostaglandinF1a,6-K-PGF1aELISAKit小鼠6同前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠黃體生成素（LH）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠環(huán)0酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠環(huán)0酸鳥苷(cGMP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠A(CsA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠B-淋巴細(xì)胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA試劑盒 ，英文名： BLC-1/CXCL13 ELISA Kit

Mouse osteoprotegerin ligand (OPGL) ELISA Kit 小鼠骨保護(hù)素配體(OPGL)ELISA試劑盒

Mouseglucocoicoidreceptor,GRELISAKit 小鼠糖皮質(zhì)類固醇受體(GR)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumahyroxine-BindingGlobulinAssay,TBGELISAKit人甲狀腺結(jié)合球蛋白規(guī)格：48T/96T

通用型鴨鼠氏菌(ST)試劑盒20次

ELISAKitβ-CG大鼠絨毛膜β規(guī)格：48T/96T

PDGFRA重組人 PDGFRa / CD140a 蛋白 Protein

胃動(dòng)素(MTL)重組蛋白 Recombinant Motilin (MTL)

GGT5重組人 GGT5 / GGTLA1 蛋白 (ECD, His 標(biāo)簽) Protein

DDR1 Protein Human 重組人 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (His 標(biāo)簽)

NA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 神經(jīng)酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性)

小鼠氣管平滑肌細(xì)胞胃動(dòng)素(MTL)重組蛋白 Recombinant Motilin (MTL)

DDR1 Protein Human 重組人 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (His 標(biāo)簽)

PDGFRA重組人 PDGFRa / CD140a 蛋白 Protein

NA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 神經(jīng)酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性)

GGT5重組人 GGT5 / GGTLA1 蛋白 (ECD, His 標(biāo)簽) Protein

原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線消毒20分鐘。開(kāi)始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨?。消化時(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過(guò)程中見(jiàn)消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過(guò)適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開(kāi)的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過(guò)大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說(shuō)明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時(shí)需要換新塞。