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人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株

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更新時間：2017-10-20 16:16:01瀏覽次數(shù)：336次

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產(chǎn)品簡介

人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株
Human Non - small cell lung cancer cell Resistant Sub - strains
貨號：A549/DDP
價格：￥1500.0
規(guī)格： 1*10?6?
細胞介紹
這株細胞是用藥物劑量增選法篩選獲得的A549細胞耐藥亞株。

詳細介紹

人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株

Human Non - small cell lung cancer cell Resistant Sub - strains

貨號：A549/DDP

價格：￥1500.0

規(guī)格： 1*10 6

細胞介紹
這株細胞是用藥物劑量增選法篩選獲得的A549細胞耐藥亞株。

人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株細胞特性
1）來源：肺癌
2）形態(tài)：上皮細胞樣
3）含量：>1x106 個/mL
4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入*使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
細胞用途：僅供科研使用。

細胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
注意：客戶收到細胞后按照下面的要求操作：培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是不含藥物的。待細胞長到 70-80%的匯合度時，去掉培養(yǎng)液，加入含 500ng/ml DDP藥物的培養(yǎng)液，放入培養(yǎng)箱，這段時間肯定會有小部分細胞懸浮起來，但是不要緊，通過換液可以去掉，下面的細胞待長滿就可以消化傳瓶了，這時可以一直用含藥培養(yǎng)液來消化培養(yǎng)細胞，一兩代之后可以將藥物濃度提高到 800ng/ml，含藥培養(yǎng)液用于細胞培養(yǎng)都沒問題的，凍存的時候就不要在凍存液里面加藥物了。
1）準備1640培養(yǎng)基(Gibco)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%，添加PS，1%，1~2ug/ml DDP。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量*，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。