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人甘露糖結(jié)合蛋白(MBL)酶聯(lián)免疫分析法

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所在地上海

更新時間:2018-12-22 01:33:18瀏覽次數(shù):570次

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人甘露糖結(jié)合蛋白(MBL)酶聯(lián)免疫分析法
試劑盒種屬:豚鼠、兔子、人、小鼠、犬、雞、羊、豬、牛、大鼠、馬、猴、各類植物等種屬標本操作簡單、快速、敏感性高、特異性強、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、可靠、竭誠期待與老師*合作!

人甘露糖結(jié)合蛋白(MBL)酶聯(lián)免疫分析法 實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人甘露糖結(jié)合蛋白/甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)水平。用純化的人甘露糖結(jié)合蛋白/甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入甘露糖結(jié)合蛋白/甘露糖結(jié)合凝集素(MBL),再與HRP標記的甘露糖結(jié)合蛋白/甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的甘露糖結(jié)合蛋白/甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人甘露糖結(jié)合蛋白/甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)濃度。

 

試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。
2.批內(nèi)與批間應分別小于9%和11%
人甘露糖結(jié)合蛋白(MBL)檢測范圍:5μg/L -150μg/L  
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標準品:180μg/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

標準品稀釋液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃保存

酶標試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

 濃縮洗滌液

20ml×1

20ml×1

2-8℃保存

人甘露糖結(jié)合蛋白(MBL)酶聯(lián)免疫分析法 操作步驟
1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為120μg/L,80μg/L ,40μg/L,20μg/L, 10μg/L)。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行

 

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