Quick Cell PCR法支原體檢測試劑盒組成
（1） 支原體引物和內參（100次）：206 μL
（2） 陽性支原體DNA：50 μL
注意1：本試劑盒提供的支原體引物和內參可供至少100次支原體檢測使用。
2：以下試劑需要自己準備：（1）滅菌的去離子水；（2）普通的Taq DNA 聚合酶和相應的緩沖液；（3）2.5 mM的dNTP；（4）6× DNA上樣緩沖液。
Quick Cell PCR法支原體檢測試劑盒使用方法
1.待測樣品的準備
為了準確判斷細胞是否有支原體的污染，待測的細胞培養(yǎng)液樣品來源于至少培養(yǎng)3天且匯合度在70-90%左右的細胞培養(yǎng)液上清（貼壁細胞）。懸浮培養(yǎng)的細胞也需要在換液傳代后，至少讓細胞生長3天再取培養(yǎng)液進行檢測。取150 μL上述待測樣品，在普通臺式離心機上1200 rpm (大約150-200 g)離心5 min，取離心后的上清100 μL用于支原體檢測，丟棄下層剩余的50 μL（含細胞沉淀）。收集并已經(jīng)離心去除細胞的待測樣品如果不立即檢測，請放于-20℃或-80℃冰箱保存，不得放于室溫或4℃冰箱。樣品在-20℃至少可以保存一個月，在-80℃基本可以*保存。
注意：本步驟的低速離心是為了去除哺乳動物細胞，以排除其不必要的干擾。所以離心力要嚴格控制在150-200 g，該離心力下，哺乳動物細胞將被沉淀下來而支原體不會。如果錯誤使用更高的離心力將可能導致支原體也被離心下來，從而導致假陰性。
注意事項
1、每次檢測都應該設有陰性對照，作用有：（1）陰性對照會有一條586 bp的內參條帶，這樣可以驗證本試劑盒含有的支原體引物和內參以及自己準備的Taq DNA 聚合酶，dNTP等試劑沒有問題；（2）只有當陰性對照的結果沒有出現(xiàn)270 bp左右的支原體特異條帶時，別的樣品的結果才是可信的。
2、如果586 bp條帶和270 bp左右的條帶都沒有出現(xiàn)（如圖1，泳道6），在排除PCR試劑的問題后（即陰性對照可以正常擴增），說明該樣品含有抑制PCR擴增的代謝產物。有關PCR的擴增會被細胞的代謝產物抑制的問題，Sigma公司的LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit（貨號MP0035）的PCR法支原體檢測試劑盒說明書中也特別提到了這點，說明這是一個PCR法支原體檢測中經(jīng)常遇到的問題，其強烈建議用試劑盒進行DNA提取后再進行鑒定。這也是PCR法支原體檢測的致命弱點。為了克服該問題，以下問題必須注意：（1）您購買的PCR法支原體檢測試劑盒，其擴增產物中必須含有內參（Internal Contol）條帶作為對照【本試劑盒的586 bp條帶就是內參條帶】。否則，如果沒有內參作為對照，即使樣品擴增后沒有支原體特異條帶，你也無法確定是因為樣品確實沒有支原體還是因為PCR被細胞的代謝產物抑制導致的假陰性。（2）如果出現(xiàn)PCR的擴增被細胞的代謝產物抑制時，請使用血液基因組DNA抽提試劑盒，抽提支原體DNA后再進行PCR鑒定。（3）同時使用本公司生產的《Quick Cell支原體快速檢測試劑盒》進行檢測，經(jīng)嚴格測試，該試劑盒的擴增不會被細胞的代謝產物抑制。
3、根據(jù)支原體DNA的序列，本試劑盒可以識別所有100多種至今已發(fā)現(xiàn)的支原體，具有廣譜的識別能力。
4、如發(fā)現(xiàn)細胞被支原體污染，本公司提供細胞支原體清除和預防試劑。
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