蛋白酶K（D1009L1160）相對分子量約為29.3 kDa, 是一種切割活性較廣的*蛋白酶?？汕懈钪灏被岷头枷阕灏被岬聂然穗逆I，應(yīng)用廣泛，可用于制備脈沖電泳的染色體DNA，蛋白質(zhì)印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶等實(shí)驗(yàn)，Proteinase K的一般工作濃度是50—100µg /ml。

詳細(xì)介紹

蛋白酶K（D1009L1160）產(chǎn)品簡介

蛋白酶K（Proteinase K），相對分子量約為29.3 kDa, 是一種切割活性較廣的*蛋白酶?？汕懈钪灏被岷头枷阕灏被岬聂然穗逆I，應(yīng)用廣泛，可用于制備脈沖電泳的染色體DNA，蛋白質(zhì)印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶等實(shí)驗(yàn)，蛋白酶K的一般工作濃度是50—100µg /ml。因蛋白酶K在變性劑如SDS（1%）中可提高其活性，所以在使用中，常根據(jù)所用緩沖液是否含有SDS、尿素、pH、溫度等因素確定具體的工作濃度。蛋白酶K在較廣的pH范圍內(nèi)（pH 4-12.5）均有活性。

蛋白酶K有兩個(gè)Ca²⁺結(jié)合位點(diǎn)，它們離酶的活性中心有一定距離，與催化機(jī)理并無直接關(guān)系。然而，如果從該酶中除去Ca²⁺，由于出現(xiàn)遠(yuǎn)程的結(jié)構(gòu)變化，催化活性將喪失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染核酸制品的蛋白質(zhì)。所以，蛋白酶k消化過程中通常也加入EDTA（以抑制依賴于mg²⁺的核酸酶的作用）。但是，如果要消化對蛋白酶k具有較強(qiáng)耐性的蛋白，如角蛋白一類，則可能需要使用含有1mmol/l Ca²⁺而不含EDTA的緩沖液。在消化完畢后、純化核酸前要加入EGTA（ph8.0）至終濃度為2mmol/l，以鰲合Ca²⁺。

蛋白酶K（D1009L1160）運(yùn)輸和儲(chǔ)存

冰袋運(yùn)輸，-20 ℃保存，可以保存12個(gè)月。避免反復(fù)凍融。

使用方法

1. 配制蛋白酶K溶液：一般以20mg/ml濃度配制蛋白酶K溶液。將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml dd水中，輕輕搖動(dòng)，直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。

2. 根據(jù)終濃度50—100µg /ml，吸取適量蛋白酶K溶液，到待消化樣品中，孵育溫度為55至65℃，理想孵育溫度為58℃，孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí);理想孵育時(shí)間為2小時(shí)。*反應(yīng)緩沖液：50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl₂ 。

注意事項(xiàng)

蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的樣品處理，它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用，能增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會(huì)，提高雜交信號(hào)。但蛋白酶K的濃度過高、消化時(shí)間過長或孵育溫度過高時(shí)，都會(huì)對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞，導(dǎo)致組織切片的脫落，細(xì)胞核的消失，從而影響雜交結(jié)果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用，解決上述出現(xiàn)的問題，并能達(dá)到理想的染色效果。

常用蛋白酶作用位點(diǎn)

蛋白酶	分類	作用位點(diǎn)	已知抑制物
氨基肽酶	金屬蛋白酶	帶有自由氨基的L-氨基酸氨基末端；不能分解由X-Pro、D或Q組成的肽鍵	2,2^-雙吡啶，1-(1)-菲咯啉
*	巰基蛋白酶	無特異性	α2巨球蛋白，TPCK，TLCK，烷化
羧肽酶A	鋅金屬蛋白酶	帶有自由氨基酸的L-氨基酸羧基端；不能分解R、P或羥*	EDTA，EGTA
羧肽酶B	鋅金屬蛋白酶	K，R羧基端	EDTA，EGTA，堿性氨基酸
羧肽酶Y	*羧肽酶	氨基酸羧基端	PMSF
組織蛋白酶C	琉基蛋白酶	氨基端雙肽，可通過K，R或P氨基端作為第二或第三個(gè)氨基酸封閉	醋酸碘，甲醛
*	*蛋白酶	在F，T或Y之后	*，PMSF，TPCK，α—巨球蛋白
膠原酶	金屬蛋白酶	在P-X-G-P肽鏈中X之后	EDTA，EGTA，還原劑，但無血清存在
dispase	金屬蛋白酶	無特異性	EDTA，EGTA，Hg²⁺，重金屬
內(nèi)肽酶Arg-C	*蛋白酶	在R之后	α巨球蛋白，TLCK
內(nèi)肽酶Asp-N	金屬蛋白酶	在D和半*之前	EDTA，α菲咯啉
內(nèi)肽酶Glu-C	*蛋白酶	在E或D之后	α巨球蛋白，TLCK
內(nèi)肽酶Lys-C	*蛋白酶	在K之后	TLCK，*，抑蛋白酶醛肽
腸激酶	*蛋白酶	在D-D-D-D-K-肽鏈中K之后
Xa因子	*蛋白酶	在R之后	PMSF，APMSF，大豆*抑制物
無花果蛋白酶	琉基蛋白酶	無特異性	TPCK，TLCK，α-巨球蛋白
*	*蛋白酶	在一些R之后	*，抑蛋白酶醛肽
木瓜蛋白酶	巰基蛋白酶	*孵育時(shí)具有廣泛特異性	TPCK，TLCK，抑蛋白酶醛肽α—巨球蛋白，烷化劑
*	酸蛋白酶	廣泛特異性	*抑制素
纖溶酶	*蛋白酶	在K或R之后	PMSF，TLCK，*，α—巨球蛋白
*	混合型	無特異性	B．M．完整藥片
蛋白酶K	*蛋白酶	廣泛特異性	PMSF，PefablocSc
枯草桿菌蛋白酶	*蛋白酶	無特異性	PMSF，α巨球蛋白，苯甲脒
熱溶素	鋅金屬蛋白酶	在非極性殘基之前	EDTA
*	*蛋白酶	在K之后	TLCK，PMSF，抑蛋白酶醛肽 *，α巨球蛋白，苯甲脒
*	*蛋白酶	在K或R之后	TLCK，PMSF，抑蛋白酶醛肽 *，α巨球蛋白

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格	保存	價(jià)格（元）
蛋白酶K	D1009L1161	1 g	-20 ℃	1350
蛋白酶K溶液（20mg/ml）	D1009L1162	2 mL	-20 ℃	120