上海邦景實業(yè)有限公司
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更新時間:2022-10-05 09:42:47瀏覽次數(shù):335
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EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0908說明書冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽儲存。
冷凍保存方法二:冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時,以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,但存活率稍微降低一些。
細(xì)胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0908說明書
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞系來源于一無精癥男性患者的外周血。2009年由中科院昆明細(xì)胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:2傳代;5-6天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0908說明書細(xì)胞傳代培養(yǎng)
一、原理 細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細(xì)胞能繼續(xù)生長,同時也將細(xì)胞數(shù)量擴大,就必須進(jìn)行傳代(再培養(yǎng))。 傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以,而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分 瓶。
二、材料和試劑 1、細(xì)胞:貼壁細(xì)胞株 2、試劑:0.25%、1640培養(yǎng)基(含10%小牛血清) 3、儀器和器材:倒置顯微鏡,培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等
三、操作步驟 1、將長滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。 2、加入0.5—1ml 0.25%溶液,使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。 3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。隨著時間的推移,原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時將棄去,加入10ml培養(yǎng)液終止消化。 觀察消化也可以用肉眼,當(dāng)見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。 4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。 附:消化液配制方法: 稱取0.25克蛋白酶(活力為1:250),加入100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解,濾器過濾除菌,4℃保存,用前可在37℃下回溫。 溶液中也可加入EDTA,使zui終濃度達(dá)0.02%。
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0908說明書注意事項:
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落,將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過夜,隔天再取出觀察。此時多數(shù)細(xì)胞均會貼壁,若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍(lán)染色測定細(xì)胞活力,如果證實細(xì)胞活力正常,請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活力,請拍下照片及時和我們,信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
4. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,細(xì)胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
5. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和公司技術(shù)部溝通交流。
6. 該細(xì)胞只能用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;PA317
CM-H102表皮角化細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
CSF1R Others Human 人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
HCT116, 人結(jié)直腸癌細(xì)胞 垂體瘤,AtT20細(xì)胞 COS-7(非洲青猴腎細(xì)胞)
人肺腺癌細(xì)胞;Calu-3
CD86 Others Mouse 小鼠 CD86 / B7-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人無色素睫狀上皮細(xì)胞 cDNAHNPCEpiC cDNA
REG3B Others Mouse 小鼠 REG3B / Pap1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
正常大鼠腎細(xì)胞;NRK
Panc 10.05細(xì)胞,人胰腺腺癌細(xì)胞 人舌鱗癌細(xì)胞系,TSCCA細(xì)胞 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞;C6
JeKo-1(人套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
Promocell C-25020 Hepatocyte Maienance Medium, 肝細(xì)胞維持培養(yǎng)液 500ml
CPM Others Mouse 小鼠 Carboxypeptidase M / CPM 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B類);F9-CAG-tTA-4D6
BxPC-3 人原位胰腺腺癌細(xì)胞
293XL-hTLR7人胚腎細(xì)胞 Human embryonic kidney cell line 293XL-hTLR7 DMEM+10% Hyclone 滅活血清+10 μg/ml Blasticidin
NOG Protein Human 重組人 Noggin / NOG 蛋白 (His 標(biāo)簽)
人前列腺平滑肌細(xì)胞(HPSMC)(5×105) 細(xì)胞名稱 種屬
BacillusMegatheriumMedium
Plate Count Agar incubation media Plate Count Agar
短短芽孢桿菌 支/瓶
ChinaBlueAgar
WortBroth
60%/L蛋白胨肉湯 60%/L NaCl Peptone Water 250 用于副溶血性弧菌的前增菌培養(yǎng)
4-甲基傘形-D-葡萄糖醛酸苷 (MUG) 0.1 0.01g添加于100ml LST-MUG中用于0157鑒定
42℃生長培養(yǎng)基 42℃growth Medium 250 用于副溶血性弧菌42℃生長試驗
40%尿素水 40%Urea Water 5ml*10 加入尿素酶瓊脂基礎(chǔ)
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0908說明書MaconkeyAgarNo.2
Malt extract broty 麥芽瓊脂 1.05397.0500 MERCK默克 incubation media Malt extract broty 麥芽瓊脂 1.05397.0500 MERCK默克
卵黃瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250g 用于厭氧梭狀芽孢桿菌的分離培養(yǎng)和酶試驗(GB/T 8538-2008,GB/T4789.28-2003中4.68,GB/T4...
干細(xì)胞*培養(yǎng)基
品紅亞鈉瓊脂 250g 用于飲用水,水源水中總大腸菌群的選擇性分離和確證(G