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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司

主營產(chǎn)品： 進(jìn)口elisa試劑盒，細(xì)胞株，細(xì)胞系，菌種

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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司

聯(lián)系人：: 劉小姐

電話：: 021-52960952

手機(jī)：: 15000017673

售后電話：: 15000017673

傳真：: 021-57690166

地址：: 上海市閔行區(qū)碧泉路36弄銀宵大廈

郵編：: 200000

網(wǎng)址：: www.bhsy-e.com/

商鋪：: http://www.yixinui.com/st582730/

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零背景平末端克隆試劑盒(Kan抗性)

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所在地 上海市

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更新時(shí)間：2022-06-13 13:52:20瀏覽次數(shù)：179

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【簡單介紹】

編號	BJ-F0164661

零背景平末端克隆試劑盒(Kan抗性)及公司其它各類產(chǎn)品：小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達(dá));DG6-VAP33-GFP
GP1BB Others Rat 大鼠 GP1BB / CD42c 細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
原代骨細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml
ECV-304細(xì)胞，臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞銅綠假單胞桿菌(綠膿桿菌) 真皮成纖

中文名稱：零背景平末端克隆試劑盒(Kan抗性)
英文名稱：Blunt Cloning Kit(Resistance to Kanamycin)
產(chǎn)品規(guī)格：25次
發(fā)貨周期：1～3天
產(chǎn)品貨號：BJ-F0164661
生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細(xì)小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長時(shí)間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點(diǎn)，本公司開發(fā)了本產(chǎn)品。產(chǎn)品介紹：

本產(chǎn)品是基于Topoisomerase能夠在幾秒鐘之內(nèi)高速連接DNA片段的原理開發(fā)的無背景克隆試劑盒，它使用了本公司通過定點(diǎn)突變改良的TOPO酶，連接效率比野生型更高。

英文名稱：Blunt Cloning Kit(Resistance to Kanamycin)

產(chǎn)品規(guī)格：25次

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 高效快速，連接反應(yīng)幾乎在幾秒鐘內(nèi)完成，連接率幾乎達(dá)到100%。

2. 適用于pfu、KOD等高保真聚合酶擴(kuò)增的平末端片段的克隆。

3. 無雜帶或引物二聚體的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物可以不經(jīng)過純化直接用于連接反應(yīng)。

4. 零背景，無需IPTG-X-Gal藍(lán)白斑篩選，故不需要IPTG-X-Gal培養(yǎng)基。

5. 本試劑盒按10μl標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系。

6. 提供含Amp和Kan兩種抗性的載體供選擇（BTN160684A是含Amp抗性TOPO載體，BTN60684K是含Kan抗性TOPO載體）。

保存條件：-20℃，有效期一年。

使用方法：本產(chǎn)品僅用于科研
注意：標(biāo)本采集人員需按有關(guān)規(guī)定做好個(gè)人防護(hù)。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內(nèi)將本產(chǎn)品分裝到自備的、螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級容器上用油性記號筆寫明樣本的種類、采樣時(shí)間、編號、患者姓名。
將密閉后的標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標(biāo)本。同時(shí)也將標(biāo)本有關(guān)信息填在標(biāo)本送檢表上，連同一級容器封于塑料袋內(nèi)。
將裝標(biāo)本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器(二級容器)內(nèi)，擰緊蓋，在容器上標(biāo)明有關(guān)信息。同一患者2份以上的密封標(biāo)本，可以放在同一個(gè)二級容器內(nèi)。二級容器要承受不少于95 KPa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的物質(zhì)。所有容器必須印有生物危險(xiǎn)標(biāo)注。
將二級容器擺放在專用運(yùn)輸箱內(nèi)(或疫苗運(yùn)輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封，由專人(2人)運(yùn)送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標(biāo)本若不能在24小時(shí)內(nèi)送達(dá)，則應(yīng)盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時(shí)間暫存，并盡快聯(lián)系遞送標(biāo)本。流感病毒在-20℃～-40℃時(shí)不穩(wěn)定，故長期保存最好在-70℃溫度以下進(jìn)行。

注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)。