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上海邦景實業(yè)有限公司
主營產(chǎn)品： 進口elisa試劑盒，細胞株，細胞系，菌種 |
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- www.bhsy-e.com/
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- 品牌 其他品牌
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- 所在地 上海市
更新時間：2022-06-13 13:57:24瀏覽次數(shù)：205
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操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。
中文名稱：NMY51酵母感受態(tài)細胞
英文名稱：NMY51 Chemically Competent Cell
產(chǎn)品規(guī)格：10×100μl|50×100μl
發(fā)貨周期：1～3天
產(chǎn)品貨號：BJ-F0164665
生物醫(yī)學(xué)實驗中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長時間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點，本公司開發(fā)了本產(chǎn)品。
產(chǎn)品介紹：
DUALmembrane系統(tǒng)是專門篩選跨膜蛋白間相互作用的檢測技術(shù)，它用分離的泛素系統(tǒng)(split-ubiquitin)直接檢測天然狀態(tài)下膜蛋白間的相互作用，是目前市面上檢測膜蛋白間相互作用的酵母雙雜系統(tǒng)。 此系統(tǒng)采用NMY51酵母菌株，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒進行蛋白互作驗證或篩庫試驗；此菌株Transformation marker為：trp1，leu2-3，報告基因為：HIS3，ADE2和lacZ，步通過營養(yǎng)缺陷型報告基因(HIS3，ADE2)進行選擇性生長篩選，進一步通過LacZ報告基因進行β-半乳糖分析顯色的定量或半定量篩選，三個獨立的報告基因，受不同啟動子的調(diào)控，降低假陽性幾率。 原理：泛素(ubiquitin)分子量很小，由76aa 殘基組成；泛素作為降解信號分子，可以連接另外一種蛋白質(zhì)的N端，然后被泛素專一性蛋白酶(UBPs)識別，從而導(dǎo)致與泛素相連的蛋白被酶解。 泛素可以人為分成兩部分：N端(Nub)，C端(Cub)。先，人為地將泛素Nub的3位異亮突變?yōu)楦?/span>(NubI突變?yōu)?/span>NubG)。這樣與Cub的親合力大大降低，避免了Cub和Nub自我結(jié)合或接近的可能性。其次，將Cub部分與人工合成的LexA-VP16轉(zhuǎn)錄激活因子融合成一個融合蛋白Cub-LexA-VP16。 正常條件下NubG不與Cub結(jié)合，UBPs也不能識別分離的泛素，轉(zhuǎn)錄激活因子也不會被切下來。后，將要檢測的蛋白質(zhì)分別與NubG和Cub融合，形成bait融合蛋(bait-cub-LexA-VP16)和prey融合蛋白(prey-NubG)。 如果bait和prey發(fā)生相互作用，就會促使NubG和Cub的相互接近，被 UBPs識別，導(dǎo)致LexA-VP16的解離，進入核內(nèi)，從而激活報告基因的轉(zhuǎn)錄。 注意事項： 1.感受態(tài)細胞好在冰上融化。 2.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。 3.同時轉(zhuǎn)化2-3種質(zhì)粒時可增加質(zhì)粒的用量。 4.NMY51酵母菌株對高溫敏感，適生長溫度為27-30℃；高于31℃，生長速度和轉(zhuǎn)化效率呈指數(shù)下降。 5.酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長速度比YPDA培養(yǎng)基慢，培養(yǎng)基中缺陷成分越多，生長越慢，以轉(zhuǎn)化涂板為例：涂YPDA平板29℃，48h培養(yǎng)可見直徑1mm克?。煌?/span>SD單缺平板29℃，48-60h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆，涂SD雙缺平板29℃，60-80h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆。 |
使用方法：本產(chǎn)品僅用于科研
注意：標(biāo)本采集人員需按有關(guān)規(guī)定做好個人防護。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內(nèi)將本產(chǎn)品分裝到自備的、螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級容器上用油性記號筆寫明樣本的種類、采樣時間、編號、患者姓名。
將密閉后的標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標(biāo)本。同時也將標(biāo)本有關(guān)信息填在標(biāo)本送檢表上，連同一級容器封于塑料袋內(nèi)。
將裝標(biāo)本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器(二級容器)內(nèi)，擰緊蓋，在容器上標(biāo)明有關(guān)信息。同一患者2份以上的密封標(biāo)本，可以放在同一個二級容器內(nèi)。二級容器要承受不少于95 KPa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的物質(zhì)。所有容器必須印有生物危險標(biāo)注。
將二級容器擺放在專用運輸箱內(nèi)(或疫苗運輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封，由專人(2人)運送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標(biāo)本若不能在24小時內(nèi)送達，則應(yīng)盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時間暫存，并盡快聯(lián)系遞送標(biāo)本。流感病毒在-20℃～-40℃時不穩(wěn)定，故長期保存最好在-70℃溫度以下進行。
冰凍切片組織TNF ALPHA蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒
石蠟切片組織TNF ALPHA蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒
細胞TNF ALPHA蛋白表達比色法定量檢測試劑盒
細胞TNF ALPHA蛋白表達熒光定量檢測試劑盒
TNF ALPHA蛋白表達西方雜交分析試劑盒
小鼠亞鹽氧化酶(SUOX)elisa ，英文名： SUOX ELISA Kit
兔子單核細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA檢測試劑盒Rabbitmonocytechemotacticprotein1/monocytechemotacticandactivatingfactor,MCP1/MCAFELISAkit 96T/48T
犬表面活性蛋白D(SP-D)免疫試劑盒 Canine surfacta protein D,SP-D ELISA Kit
英文名稱HumanHbA1cELISAKit人糖化血紅蛋白(HbA1c)elisa規(guī)格：96T/48T
大米蛋白生物萃取試劑盒20次
RatLeptin,LEPelisa大鼠瘦素(LEP)elisa規(guī)格：96T/48T
NMY51酵母感受態(tài)細胞小鼠細胞外基質(zhì)磷酸糖蛋白(MEPE)elisa檢測試劑盒
小鼠細胞外基質(zhì)蛋白1(ECM1)elisa檢測試劑盒
小鼠細胞色素P450家族成員7A1(CYP7A1)elisa檢測試劑盒
小鼠細胞色素P450家族成員3A4(CYP3A4)elisa檢測試劑盒
小鼠細胞色素P450家族成員2E1(CYP2E1)elisa檢測試劑盒
注意事項：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
