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上海邦景實業(yè)有限公司
主營產(chǎn)品： 進(jìn)口elisa試劑盒，細(xì)胞株，細(xì)胞系，菌種 |
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- 地址：
- 上海市閔行區(qū)碧泉路36弄銀宵大廈
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- 200000
- 網(wǎng)址：
- www.bhsy-e.com/
| 參考價 | 面議 |
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- 品牌 其他品牌
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- 所在地 上海市
更新時間：2022-06-13 13:30:46瀏覽次數(shù)：155
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生物醫(yī)學(xué)實驗中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細(xì)小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長時間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點，本公司開發(fā)了本產(chǎn)品。
中文名稱：pBalbSumo質(zhì)粒
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：20次(1μg)
發(fā)貨周期：1～3天
產(chǎn)品貨號：BJ-F0164637
產(chǎn)品介紹：
pBalbSumo專為目標(biāo)蛋白在大腸桿菌中可溶性表達(dá)設(shè)計，是預(yù)先用Xho I線性化的載體，可配合BalbRec PCR產(chǎn)物一步無縫克隆試劑盒（CatNo. JN0001）使用。 ??外源蛋白在大腸桿菌中表達(dá)容易形成包涵體，使獲得有生物學(xué)活性的蛋白增加困難。常見表達(dá)載體往往由于蛋白表達(dá)過快，目標(biāo)蛋白來不及正確折疊而形成包涵體。該質(zhì)粒使用于阿拉伯糖誘導(dǎo)，有較的劑量依賴性。合適的阿拉伯糖濃度能夠在保障表達(dá)效率的同時獲得高效的可溶蛋白。SUMO融合標(biāo)簽可有效促進(jìn)目標(biāo)蛋白的正確折疊，從而提高蛋白質(zhì)的可溶性，同時SUMO Protease（CatNo. PJN0016）是一種結(jié)構(gòu)特異性的蛋白酶，只切割有正確構(gòu)象的融合蛋白，因而準(zhǔn)確移除 融合標(biāo)簽。 ??目的基因擴增按常規(guī)方法設(shè)計引物后，在5′端引物前添加以下序列：GAA CAG ATT GGA GGT ATG； 3′端引物前添加：CGC GGC CGC AAG CTT。 ??注意：5′端引物從個氨基酸不是甲硫(ATG)時，可使用 GAA CAG ATT GGA GGT。不希望目標(biāo)蛋白C端保留His Tag時，3′端引物 需要加入終止密碼子。 |
使用方法：本產(chǎn)品僅用于科研
注意：標(biāo)本采集人員需按有關(guān)規(guī)定做好個人防護(hù)。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內(nèi)將本產(chǎn)品分裝到自備的、螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級容器上用油性記號筆寫明樣本的種類、采樣時間、編號、患者姓名。
將密閉后的標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標(biāo)本。同時也將標(biāo)本有關(guān)信息填在標(biāo)本送檢表上，連同一級容器封于塑料袋內(nèi)。
將裝標(biāo)本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器(二級容器)內(nèi)，擰緊蓋，在容器上標(biāo)明有關(guān)信息。同一患者2份以上的密封標(biāo)本，可以放在同一個二級容器內(nèi)。二級容器要承受不少于95 KPa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的物質(zhì)。所有容器必須印有生物危險標(biāo)注。
將二級容器擺放在專用運輸箱內(nèi)(或疫苗運輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封，由專人(2人)運送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標(biāo)本若不能在24小時內(nèi)送達(dá)，則應(yīng)盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時間暫存，并盡快聯(lián)系遞送標(biāo)本。流感病毒在-20℃～-40℃時不穩(wěn)定，故長期保存最好在-70℃溫度以下進(jìn)行。
注意事項：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
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操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。
