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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司

主營(yíng)產(chǎn)品： 進(jìn)口elisa試劑盒，細(xì)胞株，細(xì)胞系，菌種

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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司

聯(lián)系人：: 劉小姐

電話：: 021-52960952

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售后電話：: 15000017673

傳真：: 021-57690166

地址：: 上海市閔行區(qū)碧泉路36弄銀宵大廈

郵編：: 200000

網(wǎng)址：: www.bhsy-e.com/

商鋪：: http://www.yixinui.com/st582730/

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JM109感受態(tài)細(xì)胞

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所在地 上海市

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更新時(shí)間：2022-06-13 13:42:29瀏覽次數(shù)：130

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【簡(jiǎn)單介紹】

編號(hào)	BJ-F0164643

JM109感受態(tài)細(xì)胞及公司其它各類(lèi)產(chǎn)品：小鼠雪旺細(xì)胞MSC
FAS Others Rat 大鼠 FAS / TNFRSF6 / CD95 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
HEH 胚胎心臟組織來(lái)源細(xì)胞
CM-R083大鼠滑膜細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
NCI-N87 [N87]胃癌細(xì)胞
EB病毒轉(zhuǎn)化的B淋巴細(xì)胞;KMY0928 前脂肪細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

中文名稱(chēng)：JM109感受態(tài)細(xì)胞
英文名稱(chēng)：E.coli JM109 Competent Cells
產(chǎn)品規(guī)格：10×100μl|20×100μl
發(fā)貨周期：1～3天
產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-F0164643
生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細(xì)小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長(zhǎng)時(shí)間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來(lái)，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過(guò)程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點(diǎn)，本公司開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。產(chǎn)品介紹：

本公司的JM109感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌JM109菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108，-70℃保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

基因型：recA supE44 endA1 hsdR17 gyrA96relA1 thi Δ(lac-proAB) F’[traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]

特點(diǎn)：一種琥珀抑制型F’重組缺陷菌株。支持M13噬菌體載體的生長(zhǎng)，對(duì)轉(zhuǎn)染的DNA有修飾作用，但無(wú)限制作用。該菌株中的F’帶有lacZΔM15，后者使得與在λZAP中編碼的β-半乳糖苷酶氨基端進(jìn)行α-互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。

操作方法：（以下各步驟均為無(wú)菌操作）

1、將感受態(tài)細(xì)胞置于冰上融化，以下實(shí)驗(yàn)以100μl感受態(tài)細(xì)胞為例。

2、向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入需轉(zhuǎn)化的目的DNA，注意目的DNA的體積不要過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，冰浴放置30分鐘。

3、將離心管置于42℃水浴中放置60-90秒，然后快速轉(zhuǎn)移到冰浴中放置2-3分鐘，注意不要搖動(dòng)離心管。

4、向離心管中加入500ul無(wú)菌無(wú)抗的SOC或LB培養(yǎng)基，37℃ 180rpm振蕩培養(yǎng)1小時(shí)。目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。

5、取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布含相應(yīng)抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培養(yǎng)12-16小時(shí)。涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取100μl左右轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板；反之，如果轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200～300μl的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板。過(guò)多菌液可以抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過(guò)離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少可以將剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事項(xiàng)：

1、收到感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可反復(fù)凍融，否則其轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。

2、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止其它DNA的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來(lái)影響。

3、轉(zhuǎn)化時(shí)，轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源DNA量過(guò)多或體積過(guò)大反而會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時(shí)DNA體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。

4、轉(zhuǎn)化率的計(jì)算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量

5、為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉(zhuǎn)化，將損失將到低。

儲(chǔ)存條件：-70℃保存，必須加干冰運(yùn)輸。自收貨之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個(gè)月。

使用方法：本產(chǎn)品僅用于科研
注意：標(biāo)本采集人員需按有關(guān)規(guī)定做好個(gè)人防護(hù)。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內(nèi)將本產(chǎn)品分裝到自備的、螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級(jí)容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級(jí)容器上用油性記號(hào)筆寫(xiě)明樣本的種類(lèi)、采樣時(shí)間、編號(hào)、患者姓名。
將密閉后的標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標(biāo)本。同時(shí)也將標(biāo)本有關(guān)信息填在標(biāo)本送檢表上，連同一級(jí)容器封于塑料袋內(nèi)。
將裝標(biāo)本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器(二級(jí)容器)內(nèi)，擰緊蓋，在容器上標(biāo)明有關(guān)信息。同一患者2份以上的密封標(biāo)本，可以放在同一個(gè)二級(jí)容器內(nèi)。二級(jí)容器要承受不少于95 KPa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的物質(zhì)。所有容器必須印有生物危險(xiǎn)標(biāo)注。
將二級(jí)容器擺放在專(zhuān)用運(yùn)輸箱內(nèi)(或疫苗運(yùn)輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封，由專(zhuān)人(2人)運(yùn)送，不得郵寄，最好使用專(zhuān)車(chē)。
采集的標(biāo)本若不能在24小時(shí)內(nèi)送達(dá)，則應(yīng)盡快在-70℃以下保存。無(wú)-70℃條件的，需在4℃冰箱短時(shí)間暫存，并盡快聯(lián)系遞送標(biāo)本。流感病毒在-20℃～-40℃時(shí)不穩(wěn)定，故長(zhǎng)期保存最好在-70℃溫度以下進(jìn)行。

注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)。