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上海邦景實業(yè)有限公司
主營產(chǎn)品： 進(jìn)口elisa試劑盒，細(xì)胞株，細(xì)胞系，菌種 |
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- www.bhsy-e.com/
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- 所在地 上海市
更新時間：2022-06-13 11:17:41瀏覽次數(shù)：179
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操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。
中文名稱：Rosetta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞
英文名稱：Rosetta(DE3)Competent Cell
產(chǎn)品規(guī)格：100μl×10支
發(fā)貨周期：1～3天
產(chǎn)品貨號：BJ-F0164576
生物醫(yī)學(xué)實驗中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細(xì)小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長時間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點，本公司開發(fā)了本產(chǎn)品。
產(chǎn)品介紹：
本產(chǎn)品是采用進(jìn)口Rosetta菌株，經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。Rosetta菌株是攜帶氯抗性質(zhì)粒BL21的衍生菌，補充大腸桿菌缺乏的6種稀有密碼子(AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA)對應(yīng)的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系統(tǒng)中的表達(dá)水平。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)107。 使用方法： 1、取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。 2、待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1ng螺旋質(zhì)粒DNA所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。 3、42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。 4、向每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，150 rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。 5、根據(jù)實驗需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。 注意： 1)涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計的克隆數(shù)較少，可通過離心(4000rpm，2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。 2)新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。 3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。 儲存條件：-80℃。 |
使用方法：本產(chǎn)品僅用于科研
注意：標(biāo)本采集人員需按有關(guān)規(guī)定做好個人防護(hù)。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內(nèi)將本產(chǎn)品分裝到自備的、螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級容器上用油性記號筆寫明樣本的種類、采樣時間、編號、患者姓名。
將密閉后的標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標(biāo)本。同時也將標(biāo)本有關(guān)信息填在標(biāo)本送檢表上，連同一級容器封于塑料袋內(nèi)。
將裝標(biāo)本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器(二級容器)內(nèi)，擰緊蓋，在容器上標(biāo)明有關(guān)信息。同一患者2份以上的密封標(biāo)本，可以放在同一個二級容器內(nèi)。二級容器要承受不少于95 KPa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的物質(zhì)。所有容器必須印有生物危險標(biāo)注。
將二級容器擺放在專用運輸箱內(nèi)(或疫苗運輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封，由專人(2人)運送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標(biāo)本若不能在24小時內(nèi)送達(dá)，則應(yīng)盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時間暫存，并盡快聯(lián)系遞送標(biāo)本。流感病毒在-20℃～-40℃時不穩(wěn)定，故長期保存最好在-70℃溫度以下進(jìn)行。
TEM電鏡免疫細(xì)胞化學(xué)AP酶聯(lián)NBT/BCIP直接檢測試劑盒（含AP一抗）
冰凍切片免疫組織化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB基礎(chǔ)檢測試劑盒（無一抗和二抗）
冰凍切片免疫組織化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB間接檢測試劑盒（含HRP二抗）
冰凍切片免疫組織化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB*間接檢測試劑盒
冰凍切片免疫組織化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB直接檢測試劑盒（含HRP一抗）
小鼠線粒體解偶聯(lián)蛋白1(UCP1)elisa ，英文名： UCP1 ELISA Kit
兔子主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHCⅢ/RLAⅢ)ELISA檢測試劑盒RabbitmajorhistocompatibilitycomplexⅢ,MHCⅢ/RLAⅢELISAKit 96T/48T
牛游離纖溶抑制因子/激活的纖溶抑制物(TAFI)免疫試劑盒 Bovine FreeThrombin activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI ELISA Kit
英文名稱HumanEndothelialniicoxidesyhase3(eNOS-3)ELISAKit人內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)規(guī)格：96T/48T
蛋白樣品液相法去內(nèi)毒素試劑盒20次
RatN-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro,AcSDKPelisa大鼠N-乙?；?/span>-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-(AcSDKP)elisa規(guī)格：96T/48T
Rosetta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞小鼠磷酸肌醇3(PI3K)elisa分析檢測試劑盒
小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白(pAMPK)elisa檢測試劑盒
小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白(pAMPK)elisa分析檢測試劑盒
小鼠磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)(pERK)elisa檢測試劑盒免費代測
小鼠磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)（p-ERK）elisa檢測試劑盒
注意事項：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
