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人白介素6試劑盒

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更新時間：2019-06-19 16:17:33瀏覽次數(shù)：900次

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上海聯(lián)邁生物工程有限公司

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產(chǎn)品簡介

人白介素6試劑盒?規(guī)格： 96T檢測范圍： 4.69pg/ml→300pg/ml。敏感性：＜0.3pg/ml特異性：系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無交叉反應(yīng)。保存： 2-8℃（頻繁使用時）；-20℃（長時間不用時）。有效期： 6 個月（4℃）；12 個月（-20℃）。用途：用于體外定量分析人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞裂解液

詳細(xì)介紹

人白介素6試劑盒
規(guī)格： 96T
檢測范圍： 4.69pg/ml→300pg/ml。
敏感性：＜0.3pg/ml
特異性：系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無交叉反應(yīng)。
保存： 2-8℃（頻繁使用時）；-20℃（長時間不用時）。
有效期： 6 個月(4℃)；12 個月（-20℃）。
用途：用于體外定量分析人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞裂解液
人白介素6試劑盒工作原理
Interleukin-6 ，IL-6，白介素-6。IL-6 是一種多功能細(xì)胞因子，在體內(nèi)免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)、血細(xì)胞的
增生、防御機(jī)制和急性期反應(yīng)中起中心作用。既可由淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，也能由非淋巴細(xì)胞合成，如
單核/巨噬細(xì)胞，纖維母細(xì)胞，肝細(xì)胞，角化細(xì)胞，星形細(xì)胞，血管內(nèi)皮細(xì)胞和各種腫瘤細(xì)胞。IL-6
的合成受多種細(xì)胞因子、核分裂因子和抗原的刺激而增加。IL-6 是一種糖蛋白，包含 N-和 O-連
碳水化合物，分子量 21KD-28KD。其糖蛋白成份并非功能所必須。人的 IL-6 的前體有 212 個氨
基酸，切除 N-端 28 個氨基酸后，形成 184 個氨基酸的成熟蛋白質(zhì)。本試劑盒所用的標(biāo)準(zhǔn)品為重
組人 IL-6，有 184 個氨基酸，分子量 20.3KDa。
所提供的 IL-6 ELISA Kit 是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（Enzyme
Linked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA）。預(yù)先包被的抗體為單克隆抗體。檢測相抗體為單克隆抗
體，經(jīng)生物素（biotin）標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS 或 TBS 洗
滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過 PBS 或 TBS 的*洗滌后用底物 TMB 顯色。
TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣
品中的 IL-6 呈正相關(guān)。

洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將 1X 洗滌緩沖液至少 300ul 注入孔內(nèi)，浸泡 1-2 分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。

自動洗板：如果有自動洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。

樣品的準(zhǔn)備和保存

樣品如果不立即分析，應(yīng)分裝后冷凍保存，且避免反復(fù)凍融。

細(xì)胞培養(yǎng)上清——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

血清——用干凈試管收集血液，室溫凝固 30 分鐘，離心 1500×g 15 分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

血漿—在冰塊上收集肝素或 EDTA 抗凝血，抽血后 30 分鐘內(nèi)離心 1500×g 15 分鐘。血漿在 2-8℃進(jìn)一步離心 10000×g 10 分鐘，以*清除血小板。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

細(xì)胞裂解液——對于貼壁細(xì)胞，去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液，用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常 10 秒后，細(xì)胞就會被裂解。對于懸浮細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液，用槍吹打把細(xì)胞吹散，用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后，10000—14000g 離心 3-5 分鐘，取上清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

樣品稀釋的一般原則

用戶須估計(jì)樣品待測因子的含量，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA 試劑盒的*檢測范圍。根據(jù)待測因子含量高、中、低的不同，分別采取不同的

稀釋方案

高——指待測因子在 20-200ng/ml。一般按 1：100 稀釋。297ul 樣品稀釋液加 3ul 樣品。

中——指待測因子在 2-20ng/ml。一般按 1：10 稀釋。225ul 樣品稀釋液加 25ul 樣品。

低——指待測因子在 31.2-2000pg/ml。按 1：2 稀釋。100ul 樣品稀釋液加 100ul 樣品。

特低——指待測因子≤31.2pg/ml。樣品一般不做稀釋，或按 1：2 稀釋。

操作程序總結(jié)：

1．加樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng) 90 分鐘。不洗。

2．加生物素標(biāo)記抗體，37℃反應(yīng) 60 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 3 次。

3．加 ABC，37℃反應(yīng) 30 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 5 次。

4． TMB37℃反應(yīng) 15-20 分鐘。