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RwPE-2人前列腺正常細(xì)胞（STR鑒定）

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RwPE-2人前列腺正常細(xì)胞（STR鑒定）該細(xì)胞來(lái)源于54歲白人男性。源于正常成人前列腺周邊組織的上皮細(xì)胞經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)染HPV-18后建系得到該細(xì)胞株。在三維基質(zhì)膠培養(yǎng)時(shí)，在雄激素作用下，RWPE-1細(xì)胞形成腺胞并向培養(yǎng)基中分泌PSA（kallikrein 3, KLK3）。來(lái)源于RWPE-1的細(xì)胞再用Kirstin鼠類腫瘤病毒轉(zhuǎn)染Ki-
英文名稱：Human Prostate Normal Cells

詳細(xì)介紹

RwPE-2人前列腺正常細(xì)胞（STR鑒定）
英文名稱：Human Prostate Normal Cells
規(guī)格：1*10 ⁶
細(xì)胞介紹
該細(xì)胞來(lái)源于54歲白人男性。源于正常成人前列腺周邊組織的上皮細(xì)胞經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)染HPV-18后建系得到該細(xì)胞株。在三維基質(zhì)膠培養(yǎng)時(shí)，在雄激素作用下，RWPE-1細(xì)胞形成腺胞并向培養(yǎng)基中分泌PSA（kallikrein 3, KLK3）。來(lái)源于RWPE-1的細(xì)胞再用Kirstin鼠類腫瘤病毒轉(zhuǎn)染Ki-ras基因，建立了能成瘤的RWPE-2細(xì)胞株和 RWPE2-W99細(xì)胞株。同時(shí)，用N-甲醇-N-硝基脲處理RWPE-1，建立了一系列模擬前列腺癌進(jìn)程中不同時(shí)期的成瘤細(xì)胞株，分別是 WPE1-NA22, WPE1-NB14, WPE1-NB11 和 WPE1-NB26 細(xì)胞株。據(jù)提供者報(bào)道，RWPE-1 細(xì)胞株經(jīng)過(guò)檢測(cè)，乙肝、丙肝、人免疫缺陷病毒都呈陰性。
一、細(xì)胞特性
1）來(lái)源：前列腺正常細(xì)胞
2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)
3）含量：>1x106 個(gè)/mL
4）污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
二、細(xì)胞收到后處理
RwPE-2人前列腺正常細(xì)胞（STR鑒定）在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)霓k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作。鏡下觀察：未超過(guò)80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養(yǎng)液，懸浮細(xì)胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中，加入約6ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
2、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集，1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，進(jìn)行離心收集，1000RPM條件下離心5分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？
（1）細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；