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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時間：2018-06-11 16:57:07瀏覽次數(shù)：236次
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一站式miRNA尿素-PAGE電泳套裝尿素-丙烯酰胺凝膠電泳（Urea PAGE）是目前分離100 nt以下的小片段RNA，尤其是20 nt左右的microRNA（miRNA）分子的主要方法，但是單獨配制各種溶液十分繁瑣，為此聯(lián)邁基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點:
1. 一站式，即開即用，十分方便。
2. 安全，免去了實驗人員接觸粉末狀的劇毒物品丙烯酰胺。
一站式miRNA尿素-PAGE電泳套裝
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
你 | 30次 | 1390元 |
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尿素-丙烯酰胺凝膠電泳（Urea PAGE）是目前分離100 nt以下的小片段RNA，尤其是20 nt左右的microRNA（miRNA）分子的主要方法，但是單獨配制各種溶液十分繁瑣，為此聯(lián)邁基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點:
1. 一站式，即開即用，十分方便。
2. 安全，免去了實驗人員接觸粉末狀的劇毒物品丙烯酰胺。
3. 靈活，一站式miRNA尿素-PAGE電泳套裝可以根據(jù)RNA的長度，用高濃度的母液配制各種濃度的Urea-PAGE。
4. 含聯(lián)邁基因*的固相RNase清除劑，可清除工作環(huán)境中RNase的污染。
5. 電泳后可直接用于UV觀察、銀染、膠回收、Northern雜交和放射自顯影等。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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