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多克隆抗體

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上海聯(lián)邁生物工程有限公司

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多克隆抗體就是利用T載體兩個(gè)3'端各帶有一個(gè)T突出，而PCR擴(kuò)增產(chǎn)物兩個(gè)3'端各帶有一個(gè)A突出的特點(diǎn)，在DNA連接酶的作用下，將PCR產(chǎn)物克隆到T載體中的過程，它是克隆PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的主要手段。本產(chǎn)品提供了完成AT克隆的所有成份，具有下列特點(diǎn)： 1. 一站式，用戶只需要準(zhǔn)備PCR產(chǎn)物即可進(jìn)行AT克隆。

詳細(xì)介紹

多克隆抗體

抗原通常是由多個(gè)抗原決定簇組成的，由一種抗原決定簇刺激機(jī)體，由一個(gè)B淋巴細(xì)胞接受該抗原刺激所產(chǎn)生的抗體稱之為單克隆抗體（Monclone antibody）。由多種抗原決定簇刺激機(jī)體，相應(yīng)地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體，這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體，機(jī)體內(nèi)所產(chǎn)生的抗體就是；除了抗原決定簇的多樣性以外，同樣一種抗原決定簇，也可刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五類抗體?？乖碳C(jī)體，產(chǎn)生免疫學(xué)反應(yīng)，由機(jī)體的漿細(xì)胞合成并分泌的與抗原有特異性結(jié)合能力的一組球蛋白，這就是免疫球蛋白，這種與抗原有特異性結(jié)合能力的免疫球蛋白就是抗體。

1. 一站式，用戶只需要準(zhǔn)備PCR產(chǎn)物即可進(jìn)行AT克隆。AT克隆就是利用T載體兩個(gè)3'端各帶有一個(gè)T突出，而PCR擴(kuò)增產(chǎn)物兩個(gè)3'端各帶有一個(gè)A突出的特點(diǎn)，在DNA連接酶的作用下，將PCR產(chǎn)物克隆到T載體中的過程，它是克隆PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的主要手段。本產(chǎn)品提供了完成AT克隆的所有成份，具有下列特點(diǎn)：

2. T載體由XcmI酶切方一站式TA克隆試劑盒法制備，兩個(gè)5'端100%含T突出，自連率幾乎為零。

3. 克隆效率高，一次AT克隆實(shí)驗(yàn)一般能得到上百個(gè)重組子。

4. 陽性率高，一般能到90%以上，大大縮短了篩選工作。

5. 提供供兩次實(shí)驗(yàn)用的對(duì)照插入片段，方便分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

6. 插入位點(diǎn)兩側(cè)有對(duì)稱的常見酶切位點(diǎn)（如BstZI、EcoRI、NotI），便于對(duì)克隆的PCR片段進(jìn)行近一步的分析。

7. 克隆位點(diǎn)兩側(cè)分別有T7和SP6 RNA聚合酶啟動(dòng)子，便于用克隆的PCR片段制備RNA探針。

8. 可以使用pUC/M13 Forward和Reverse測(cè)序引物測(cè)定插入片段的序列。

9. T克隆位點(diǎn)位于β-半乳糖苷酶的α-肽編碼區(qū)內(nèi)，可以進(jìn)行藍(lán)白斑篩選。

10. 含有絲狀噬菌體f1 復(fù)制起始子，可以制備單鏈DNA。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。