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自誘導培養(yǎng)基（lac啟動子）

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更新時間：2018-06-14 14:02:41瀏覽次數(shù)：526次

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產(chǎn)品簡介

自誘導培養(yǎng)基（lac啟動子）本產(chǎn)品是在pET生長培養(yǎng)基的基礎上開發(fā)而成的，它利用E.coli自身對培養(yǎng)基中碳源和能源的調(diào)控利用機制，實現(xiàn)外源蛋白在細菌達到飽和期后的自動誘發(fā)。具有下列特點：
1. 不需添加任何IPTG或相關誘導物，節(jié)約成本。
2. 免去了密切監(jiān)控菌液密度的過程，尤其適合大規(guī)模篩選。

詳細介紹

自誘導培養(yǎng)基（lac啟動子）

名稱	規(guī)格	價格	手冊
自誘導培養(yǎng)基（lac啟動子）	200mL	690元

本產(chǎn)品是在pET生長培養(yǎng)基的基礎上開發(fā)而成的，它利用E.coli自身對培養(yǎng)基中碳源和能源的調(diào)控利用機制，實現(xiàn)外源蛋白在細菌達到飽和期后的自動誘發(fā)。具有下列特點：

1. 不需添加任何IPTG或相關誘導物，節(jié)約成本。

2. 免去了密切監(jiān)控菌液密度的過程，尤其適合大規(guī)模篩選。

3. 細菌生長密度遠高于IPTG誘導表達系統(tǒng) 。

4. 外源蛋白表達量遠遠高于IPTG誘導表達系統(tǒng)。

5. 本產(chǎn)品即開即用，操作簡單。

6. 與各種細胞培養(yǎng)容器兼容（如培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)罐、深孔管、發(fā)酵罐等）。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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