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Orgami（DE3）plysS大腸桿菌

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更新時間：2018-06-14 15:31:53瀏覽次數(shù)：433次

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產(chǎn)品簡介

Orgami（DE3）plysS大腸桿菌Origami系列菌株是K-12細胞的衍生菌，在trxB和gor基因上同時含有突變，這使得該菌株能夠更加高效的在細胞質(zhì)內(nèi)生成二硫鍵，有助于含二硫鍵蛋白的活性蛋白形成。Origami系列菌株的感受態(tài)細胞能夠用于氨芐抗性質(zhì)粒的蛋白表達，尤其是和pET32a載體能夠*搭配使用。pET32a載體含有thioredoxin （TRX）融合標簽，能夠高效提升胞質(zhì)內(nèi)蛋白

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Orgami(DE3)plysS大腸桿菌

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Orgami(DE3)plysS大腸桿菌	1管	詢價

Origami系列菌株是K-12細胞的衍生菌，在trxB和gor基因上同時含有突變，這使得該菌株能夠更加高效的在細胞質(zhì)內(nèi)生成二硫鍵，有助于含二硫鍵蛋白的活性蛋白形成。Origami系列菌株的感受態(tài)細胞能夠用于氨芐抗性質(zhì)粒的Orgami(DE3)plysS大腸桿菌蛋白表達，尤其是和pET32a載體能夠*搭配使用。pET32a載體含有thioredoxin (TRX)融合標簽，能夠高效提升胞質(zhì)內(nèi)蛋白二硫鍵的形成。DE3是溶源性的λDE3，在lacUV5啟動子下攜帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝。該菌株適用于pET系列載體及其他T7啟動子系列載體。菌株含有的pLSs質(zhì)粒能夠產(chǎn)生T7溶菌酶，可以有效降低目的基因的基礎表達水平。pLySs質(zhì)粒使得該菌株具有氯霉素抗性。pLySs質(zhì)粒的起始復制位點是p15 Origin, 這使得該質(zhì)粒能夠和pUC-及pBR322-衍生的質(zhì)?；ハ喙泊妗?/span>
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，Orgami(DE3)plysS大腸桿菌離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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