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動(dòng)物細(xì)胞核蛋白微量制備試劑盒

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動(dòng)物細(xì)胞核蛋白微量制備試劑盒DNA只存在于細(xì)胞核內(nèi)，因此參與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和DNA復(fù)制的蛋白質(zhì)主要存在于細(xì)胞核中，要研究蛋白質(zhì)與DNA的相互作用，首先需要制備能夠與DNA作用的天然細(xì)胞核蛋白質(zhì)。目前、細(xì)胞核蛋白質(zhì)制備方法一般都比較繁瑣，一次處理大量樣品時(shí)尤其不便，為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，用于從哺乳動(dòng)物組織和培養(yǎng)細(xì)胞核蛋白的微量提取，它具有下列特點(diǎn)：
1. 提取制備過程簡(jiǎn)便，只需要一小時(shí)。

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動(dòng)物細(xì)胞核蛋白微量制備試劑盒

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動(dòng)物細(xì)胞核蛋白微量制備試劑盒	100次	詢價(jià)

DNA只存在于細(xì)胞核內(nèi)，因此參與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和DNA復(fù)制的蛋白質(zhì)主要存在于細(xì)胞核中，要研究蛋白質(zhì)與DNA的相互作用，首先需要制備能夠與DNA作用的天然細(xì)胞核蛋白質(zhì)。目前、細(xì)胞核蛋白質(zhì)制備方法一般都比較繁瑣，一次處理大量樣品時(shí)尤其不便，為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，用于從哺乳動(dòng)物組織和培養(yǎng)細(xì)胞核蛋白的微量提取，它具有下列特點(diǎn)：

1. 提取制備過程簡(jiǎn)便，只需要一小時(shí)。

2. 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好，尤其適合同時(shí)處理多個(gè)樣品。

3. 可用于培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞，也可以用于組織細(xì)胞。

5. 制備的核蛋白能保持天然活性，可以直接用于轉(zhuǎn)錄因子活性分析、凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)（gel shift assay）、免疫共沉淀、Western Blotting、DNA足跡圖實(shí)驗(yàn)甲基化干擾實(shí)驗(yàn)酶活性測(cè)定等研究。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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