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更新時(shí)間：2018-06-15 13:14:34瀏覽次數(shù)：234次
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一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒細(xì)胞質(zhì)是真核細(xì)胞活動(dòng)的重要場(chǎng)所，很多與新陳代謝和信號(hào)傳遞的蛋白質(zhì)都存在于細(xì)胞質(zhì)中，這些蛋白就叫胞漿蛋白。本產(chǎn)品就是專門用于小量真核培養(yǎng)細(xì)胞中制備胞漿蛋白，它具有下列特點(diǎn)：
1. 一步式操作，整個(gè)提取制備過(guò)程簡(jiǎn)便，只需要半小時(shí)。
一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒 | 30次 | 290元 |
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細(xì)胞質(zhì)是真核細(xì)胞活動(dòng)的重要場(chǎng)所，很多與新陳代謝和信號(hào)傳遞的蛋白質(zhì)都存在于細(xì)胞質(zhì)中，這些蛋白就叫胞漿蛋白。本產(chǎn)品就是專門用于小量真核培養(yǎng)細(xì)胞中制備胞漿蛋白，它具有下列特點(diǎn)：
1. 一步式操作，整個(gè)提取制備過(guò)程簡(jiǎn)便，只需要半小時(shí)。
2. 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好，尤其適合同時(shí)處理多個(gè)樣品。
3. 可用于培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞，也可以用于新鮮動(dòng)物組織細(xì)胞。
4. 溫和裂解法，制備的胞漿蛋白能保持天然活性，可以直接用于活性檢測(cè)、蛋白濃度測(cè)定、各種蛋白質(zhì)電泳等后續(xù)研究。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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