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細(xì)菌膜蛋白質(zhì)微量提取試劑盒本試劑盒是基于超速離心的快速提取細(xì)菌膜蛋白的試劑盒。其原理是裂解細(xì)胞后，通過(guò)超速離心分離出細(xì)胞膜和附著的蛋白質(zhì)。跟傳統(tǒng)的密度梯度離心法和去污劑法相比，本方法具有下列特點(diǎn)：
1. 一步式分離細(xì)胞膜和膜蛋白，密度梯度離心法簡(jiǎn)單快捷。
2. 膜蛋白純度高，能夠去除各種胞漿蛋白的污染，也能去除松散附著在細(xì)胞膜上的蛋白，所得膜蛋白主要是整合蛋白。
3. 膜蛋白完整性好，主要是由于試
細(xì)菌膜蛋白質(zhì)微量提取試劑盒
名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
細(xì)菌膜蛋白質(zhì)微量提取試劑盒 | 50次 | 990元 |
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本試劑盒是基于超速離心的快速提取細(xì)菌膜蛋白的試劑盒。其原理是裂解細(xì)胞后，通過(guò)超速離心分離出細(xì)胞膜和附著的蛋白質(zhì)。跟傳統(tǒng)的密度梯度離心法和去污劑法相比，本方法具有下列特點(diǎn)：
1. 一步式分離細(xì)胞膜和膜蛋白，密度梯度離心法簡(jiǎn)單快捷。
2. 膜蛋白純度高，能夠去除各種胞漿蛋白的污染，也能去除松散附著在細(xì)胞膜上的蛋白，所得膜蛋白主要是整合蛋白。
3. 膜蛋白完整性好，主要是由于試劑中含有抑制蛋白酶活性的成分。
4. 回收效率高，一般能得到相當(dāng)于總蛋白量6%的膜蛋白。
5. 可用于E.coli，S.typhimurium，K.aerogens，P.aeruginosa，C. crescentus等細(xì)菌。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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