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更新時(shí)間：2018-06-15 13:30:27瀏覽次數(shù)：176次
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包涵體微量純化試劑盒包涵體（Inclusion Body）是指細(xì)菌表達(dá)（主要是大腸桿菌）的蛋白在細(xì)胞胞漿內(nèi)（對(duì)胞漿蛋白）或膜間內(nèi)（對(duì)分泌蛋白）凝集形成的無(wú)活性的固體顆粒。包涵體形成的主要原因是在重組蛋白的表達(dá)過(guò)程中缺乏某些蛋白折疊輔助因子，或環(huán)境不適導(dǎo)致無(wú)法形成正確的蛋白質(zhì)次級(jí)鍵。由于包涵體主要由重組蛋白質(zhì)組成，因此分離純化包涵體是分離純化具有活性的重組蛋白的*步。本產(chǎn)品就是用于快速的提取高質(zhì)量
包涵體微量純化試劑盒
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
包涵體微量純化試劑盒 | 20次 | 990元 |
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包涵體（Inclusion Body）是指細(xì)菌表達(dá)（主要是大腸桿菌）的蛋白在細(xì)胞胞漿內(nèi)（對(duì)胞漿蛋白）或膜間內(nèi)（對(duì)分泌蛋白）凝集形成的無(wú)活性的固體顆粒。包涵體形成的主要原因是在重組蛋白的表達(dá)過(guò)程中缺乏某些蛋白折疊輔助因子，或環(huán)境不適導(dǎo)致無(wú)法形成正確的蛋白質(zhì)次級(jí)鍵。由于包涵體主要由重組蛋白質(zhì)組成，因此分離純化包涵體是分離純化具有活性的重組蛋白的*步。本產(chǎn)品就是用于快速的提取高質(zhì)量的包涵體。它具有下列特點(diǎn)：
1. 操作簡(jiǎn)單快速，整個(gè)過(guò)程只要三十分鐘左右。
2. 微量純化，可以在1.5 mL離心管中完成。
3. 能有效去除包涵體中的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜等非重組蛋白成份，使重組蛋白所占比重達(dá)到60%以上。
4. 細(xì)胞裂解通過(guò)非離子洗滌劑的化學(xué)裂解法，裂解更加溫和。
5. 得到的包涵體可以用于重折疊。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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