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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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蘇木素染色液蘇木精(HE)是從熱帶豆科植物蘇木的干枝中提取的一種色素,是組織化學(xué)和免疫組織化學(xué)中較常用的染料之一。蘇木精不能直接染色,必須暴露在空氣中變成氧化蘇木精(又叫蘇木素)-成熟后才能使用。
名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
蘇木素染色液 | 15 mL | 90元 |
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蘇木精(HE)是從熱帶豆科植物蘇木的干枝中提取的一種色素,是組織化學(xué)和免疫組織化學(xué)中常用的染料之一。蘇木精不能直接染色,必須暴露在空氣中變成氧化蘇木精(又叫蘇木素)-成熟后才能使用。蘇木精的成熟過(guò)程需時(shí)較長(zhǎng),配制后時(shí)間愈久,染色力愈強(qiáng)。采用蘇木素染色液進(jìn)行免疫染色后的復(fù)染,操作步驟簡(jiǎn)便,操作時(shí)間短。可以廣泛用于組織切片或培養(yǎng)細(xì)胞的染色,或與免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光、原位雜交等配合使用。使用蘇木素染色試劑盒,染色后可以進(jìn)行免疫染色或其它染料的復(fù)染。蘇木素染色后的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色,細(xì)胞漿呈現(xiàn)粉紅色或紅色。染色液也可以重復(fù)使用,直至認(rèn)為效果不佳時(shí)再換用新的染色液。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過(guò)離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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