上海博湖生物科技有限公司
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更新時間:2023-10-26 14:32:49瀏覽次數(shù):549
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BJ5183-AD-1 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10操作方法(以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行)
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中,置于冰浴中。
BJ5183-AD-1 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實驗以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和),輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物,在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中,使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘,該過程不要搖動離心管。
BJ5183-AD-1 感受態(tài)細(xì)胞100ul*104 向每個離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基(不含抗生素), 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(160-220 轉(zhuǎn)/分鐘),目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。
5 將離心管內(nèi)容物混勻,吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養(yǎng)12-16 小時。
● 涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多,可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之,如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少,可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計的克隆較少,可通過離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)
注意事項
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃,不可多次凍融和放置時間過長,以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時,應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功,可以保留部分連接反應(yīng)液,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到低。
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大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒 :英文名稱; Rat Transforming Growth factor β1,TGF-β1 ELISA kit 購買我公司ELISA試劑盒保證質(zhì)量,靈敏性高、特異性強、重復(fù)性好等優(yōu)點已經(jīng)得到廣大客戶的認(rèn)可,您可放心,且我司有專門的售后部門對您進(jìn)行全線跟蹤。 :規(guī)格; 96T/48T 大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒廠家 大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒報價
大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒 :英文名稱; Rat Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA KIT 購買我公司ELISA試劑盒保證質(zhì)量,靈敏性高、特異性強、重復(fù)性好等優(yōu)點已經(jīng)得到廣大客戶的認(rèn)可,您可放心,且我司有專門的售后部門對您進(jìn)行全線跟蹤。 :規(guī)格; 96T/48T 大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒廠家 大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒報價
大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒 :英文名稱; Rat Vascular Endothelial cell Growth Factor,VEGF ELISA Kit 購買我公司ELISA試劑盒保證質(zhì)量,靈敏性高、特異性強、重復(fù)性好等優(yōu)點已經(jīng)得到廣大客戶的認(rèn)可,您可放心,且我司有專門的售后部門對您進(jìn)行全線跟蹤。 :規(guī)格; 96T/48T 大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒廠家 大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒報價
大鼠血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒 :英文名稱; Rat platelet factor 3, PF3 ELISA Kit 購買我公司ELISA試劑盒保證質(zhì)量,靈敏性高、特異性強、重復(fù)性好等優(yōu)點已經(jīng)得到廣大客戶的認(rèn)可,您可放心,且我司有專門的售后部門對您進(jìn)行全線跟蹤。 :規(guī)格; 96T/48T 大鼠血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒廠家 大鼠血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒報價
大鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒 :英文名稱; Rat Interferon β,IFN-β/IFNB ELISA Kit 購買我公司ELISA試劑盒保證質(zhì)量,靈敏性高、特異性強、重復(fù)性好等優(yōu)點已經(jīng)得到廣大客戶的認(rèn)可,您可放心,且我司有專門的售后部門對您進(jìn)行全線跟蹤。 :規(guī)格; 96T/48T 大鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒廠家 大鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒報價
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