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上海博湖生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 高密度脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒,同型半胱氨酸ELISA檢測(cè)試劑盒,游離脂肪酸ELISA檢測(cè)試劑盒 |
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更新時(shí)間：2023-10-26 19:29:42瀏覽次數(shù)：553
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Ar A4 感受態(tài)細(xì)胞100ul*100操作方法（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
Ar A4 感受態(tài)細(xì)胞100ul*1002 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和），輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘，該過程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)（160-220 轉(zhuǎn)/分鐘），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
Ar A4 感受態(tài)細(xì)胞100ul*1005 將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
● 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少，可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板）
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃，不可多次凍融和放置時(shí)間過長(zhǎng)，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品：
Aβ1-40 大鼠β淀粉樣蛋白1-40 規(guī)格： 48T/96T
BMG/β2-MG 大鼠β2微球蛋白 規(guī)格： 48T/96T
β2-GP1 IgA/G/M 大鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M 規(guī)格： 48T/96T
α-glucosidase 大鼠α葡萄糖苷酶 規(guī)格： 48T/96T
α-GST 大鼠αS轉(zhuǎn)移酶 規(guī)格： 48T/96T
IFN-α 大鼠α干擾素 規(guī)格： 48T/96T
AFU 大鼠αL巖藻糖苷酶 規(guī)格： 48T/96T
α1-MG 大鼠α1微球蛋白 規(guī)格： 48T/96T
α1-AGP 大鼠α1酸性糖蛋白 規(guī)格： 48T/96T
TLR-9/CD289 大鼠Toll樣受體9 規(guī)格： 48T/96T
TIEG1 大鼠TGF-β誘導(dǎo)早期基因1 規(guī)格： 48T/96T
S-100 大鼠S100蛋白 規(guī)格： 48T/96T
S-100B 大鼠S100B蛋白 規(guī)格： 48T/96T
P-Selectin/CD62P 大鼠P選擇素 規(guī)格： 48T/96T
P53 大鼠P53 規(guī)格： 48T/96T
大鼠N-乙酰基-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰- 大鼠N-乙?；?絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰- 規(guī)格： 48T/96T
NAG 大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 規(guī)格： 48T/96T
NT-proBNP 大鼠N端前腦鈉素 規(guī)格： 48T/96T
NT-proBNP 大鼠N端前腦鈉素 規(guī)格： 48T/96T
PAL 大鼠L苯解氨酶 規(guī)格： 48T/96T
Flt3L 大鼠FMS樣激酶3配體 規(guī)格： 48T/96T
Flt3 大鼠FMS樣激酶3 規(guī)格： 48T/96T
E-Selectin/CD62E 大鼠E選擇素 規(guī)格： 48T/96T
E-Cad 大鼠E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白 規(guī)格： 48T/96T
CNP 大鼠C型鈉尿肽 規(guī)格： 48T/96T
C-Peptide 大鼠C肽 規(guī)格： 48T/96T
CRP 大鼠C反應(yīng)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
CXCR3 大鼠CXC趨化因子受體3 規(guī)格： 48T/96T
BF 大鼠B因子 規(guī)格： 48T/96T
Bcl-2 大鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2 規(guī)格： 48T/96T
Bid 大鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
AP12 大鼠apelin 12 規(guī)格： 48T/96T
8-iso-PG 大鼠8異前列腺素 規(guī)格： 48T/96T
8-OHdG 大鼠8羥基脫氧鳥苷 規(guī)格： 48T/96T
6-keto-PGF1a 大鼠6酮前列腺素F1a 規(guī)格： 48T/96T
6-K-PG 大鼠6酮前列腺素 規(guī)格： 48T/96T
5-HT 大鼠5羥色胺 規(guī)格： 48T/96T
5-NT 大鼠5核苷酸酶 規(guī)格： 48T/96T
Col Ⅳ 大鼠Ⅳ型膠原 規(guī)格： 48T/96T
PⅢNP 大鼠Ⅲ型前膠原肽 規(guī)格： 48T/96T
Ar A4 感受態(tài)細(xì)胞100ul*100 PⅢNT 大鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽 規(guī)格： 48T/96T
Col Ⅲ 大鼠Ⅲ型膠原 規(guī)格： 48T/96T
Col Ⅱ 大鼠Ⅱ型膠原 規(guī)格： 48T/96T
小鼠L苯解氨酶
