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上海博湖生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 高密度脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒,同型半胱氨酸ELISA檢測(cè)試劑盒,游離脂肪酸ELISA檢測(cè)試劑盒 |
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C58C1 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*10操作方法（以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無(wú)菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
C58C1 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*102 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和），輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘，該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無(wú)菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)（160-220 轉(zhuǎn)/分鐘），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
C58C1 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*105 將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開(kāi)。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
● 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少，可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過(guò)離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板）
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃，不可多次凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品：
ELISA Kit，48T/96T 規(guī)格： 48T/96T
β-Lg 人β乳球蛋白 規(guī)格： 48T/96T
β-OHB 人β羥丁酸 規(guī)格： 48T/96T
βGD 人β葡萄糖醛酸苷酶 規(guī)格： 48T/96T
β-glucosidase 人β葡糖苷酶 規(guī)格： 48T/96T
β-naphthol 人β萘酚 規(guī)格： 48T/96T
BLI 人β內(nèi)酰胺酶抑制劑 規(guī)格： 48T/96T
β-lactamase 人β內(nèi)酰胺酶 規(guī)格： 48T/96T
β-EPR 人β內(nèi)啡肽受體 規(guī)格： 48T/96T
β-EP 人β內(nèi)啡肽 規(guī)格： 48T/96T
β-Cat 人β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
β Manase 人β甘露糖苷酶 規(guī)格： 48T/96T
IFN-β/IFNB 人β干擾素 規(guī)格： 48T/96T
Aβ1-42 人β淀粉樣蛋白1-42 規(guī)格： 48T/96T
Aβ1-40 人β淀粉樣蛋白1-40 規(guī)格： 48T/96T
β-LPH 人β-促脂素 規(guī)格： 48T/96T
βGAL 人β半乳糖苷酶 規(guī)格： 48T/96T
β-hexosaminidase A 人β氨基己糖苷酶A 規(guī)格： 48T/96T
integrin β2/CD11+CD18 人β2整合素 規(guī)格： 48T/96T
BMG/β2-MG 人β2微球蛋白 規(guī)格： 48T/96T
β2-GP1 Ab IgM 人β2糖蛋白1抗體IgM 規(guī)格： 48T/96T
β2-GP1 Ab IgG 人β2糖蛋白1抗體IgG 規(guī)格： 48T/96T
β2-GP1 IgA/G/M 人β2糖蛋白1抗體IgA/G/M 規(guī)格： 48T/96T
β2-GP1 Ab IgA 人β2糖蛋白1抗體IgA 規(guī)格： 48T/96T
β2-GP 人β2糖蛋白 規(guī)格： 48T/96T
α-enolase 人α烯醇化酶 規(guī)格： 48T/96T
α-SYN 人α突觸核蛋白 規(guī)格： 48T/96T
α-La 人α乳清蛋白 規(guī)格： 48T/96T
αHBDH 人α羥基丁酸脫氫酶 規(guī)格： 48T/96T
α-glucosidase 人α葡萄糖苷酶 規(guī)格： 48T/96T
α-SMA 人α平滑肌肌動(dòng)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
α-EP 人α-內(nèi)*肽 規(guī)格： 48T/96T
α Actin 人α肌動(dòng)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
α-SCA 人α橫紋肌肌動(dòng)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
α-GST 人α*S轉(zhuǎn)移酶 規(guī)格： 48T/96T
α Manase 人α甘露糖苷酶 規(guī)格： 48T/96T
C58C1 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*10
ACTN-3 人α-輔肌動(dòng)蛋白3 規(guī)格： 48T/96T
Gal 人α半乳糖基抗體 規(guī)格： 48T/96T
