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上海博湖生物科技有限公司
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更新時(shí)間：2023-10-26 20:59:23瀏覽次數(shù)：909
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BY4741 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10操作方法（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
BY4741 感受態(tài)細(xì)胞100ul*102 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和），輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘，該過程不要搖動離心管。
4 向每個離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)（160-220 轉(zhuǎn)/分鐘），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
BY4741 感受態(tài)細(xì)胞100ul*105 將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
● 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少，可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板）
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃，不可多次凍融和放置時(shí)間過長，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品：
FcγRⅠ/CD64 G Fc段受體Ⅰ 規(guī)格： 48T/96T
IgE E 規(guī)格： 48T/96T
FcεRⅡ/CD23 E Fc段受體Ⅱ 規(guī)格： 48T/96T
FcεRⅠ E Fc段受體Ⅰ 規(guī)格： 48T/96T
IgA A 規(guī)格： 48T/96T
FcαRⅠ/CD89 A Fc段受體Ⅰ 規(guī)格： 48T/96T
Irna 人免疫核糖核酸 規(guī)格： 48T/96T
irGH 人免疫反應(yīng)性生長激素 規(guī)格： 48T/96T
PWM 人美洲商陸素 規(guī)格： 48T/96T
CED-3 人美麗線蟲凋亡基因 規(guī)格： 48T/96T
ankyrin 人錨蛋白 規(guī)格： 48T/96T
ATM 人毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)突變基因 規(guī)格： 48T/96T
Gliadin-IgA 人麥角蛋白IgA 規(guī)格： 48T/96T
MV IgM 人麻疹病毒IgM 規(guī)格： 48T/96T
MV IgG 人麻疹病毒IgG 規(guī)格： 48T/96T
MV 人麻疹病毒 規(guī)格： 48T/96T
PF 人落葉型天皰瘡抗體 規(guī)格： 48T/96T
Helical Peptide 人螺旋肽 規(guī)格： 48T/96T
RV Ag 人輪狀病毒抗原 規(guī)格： 48T/96T
OVA sIgG 人卵清蛋白特異性IgG 規(guī)格： 48T/96T
OVA sIgE 人卵清蛋白特異性IgE 規(guī)格： 48T/96T
人卵巢癌標(biāo)志物CA125ELISA Kit，48T/96T 人卵巢癌標(biāo)志物CA125ELISA Kit，48T/96T 規(guī)格： 48T/96T
PEA 人綠膿桿菌外毒素A 規(guī)格： 48T/96T
TrxR 人硫氧還蛋白還原酶 規(guī)格： 48T/96T
Trx 人硫氧化還原蛋白 規(guī)格： 48T/96T
MS 人硫酸褪黑色素 規(guī)格： 48T/96T
KS 人硫酸角質(zhì)素 規(guī)格： 48T/96T
HSPG 人硫酸肝素糖蛋白 規(guī)格： 48T/96T
JE IgG 人流行性乙型腦炎抗體IgG 規(guī)格： 48T/96T
EP 人流行性腮腺炎 規(guī)格： 48T/96T
FLU 人流感病毒抗體IgG 規(guī)格： 48T/96T
FLU A 人流感病毒A 規(guī)格： 48T/96T
SCCAg 人鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原 規(guī)格： 48T/96T
SCCAg-2 人鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原2 規(guī)格： 48T/96T
BY4741 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10 PIPLC 人磷酯酰肌醇特異性磷酯酶C 規(guī)格： 48T/96T
PLCγ1 人磷酯酶Cγ鏈 規(guī)格： 48T/96T
PLC 人磷酯酶C 規(guī)格： 48T/96T
