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上海博湖生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 高密度脂蛋白ELISA檢測試劑盒,同型半胱氨酸ELISA檢測試劑盒,游離脂肪酸ELISA檢測試劑盒 |
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更新時間：2023-10-26 21:00:55瀏覽次數(shù)：1113
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BY4741 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50? 操作方法（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進行）
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實驗以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
BY4741 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50? 2 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和），輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘，該過程不要搖動離心管。
4 向每個離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時（160-220 轉(zhuǎn)/分鐘），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
5 將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 小時。
BY4741 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50? ● 涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少，可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板）
注意事項
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進行轉(zhuǎn)化操作時，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品：
NGB 人腦紅蛋白 規(guī)格： 48T/96T
ENK 人腦啡肽 規(guī)格： 48T/96T
BGP/Gehrelin 人腦腸肽 規(guī)格： 48T/96T
visfatin 人內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素 規(guī)格： 48T/96T
vaspin 人內(nèi)臟脂肪特異性蛋白酶抑制劑 規(guī)格： 48T/96T
EL 人內(nèi)皮脂肪酶 規(guī)格： 48T/96T
ES 人內(nèi)皮抑素 規(guī)格： 48T/96T
eNOS-3 人內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3 規(guī)格： 48T/96T
eNOS 人內(nèi)皮型一氧化氮合成酶 規(guī)格： 48T/96T
ET-1 人內(nèi)皮素1 規(guī)格： 48T/96T
ET-1 人內(nèi)皮素1 規(guī)格： 48T/96T
EG-VEGF 人內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子 規(guī)格： 48T/96T
ET 人內(nèi)毒素 規(guī)格： 48T/96T
TdT 人末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶 規(guī)格： 48T/96T
TCC C5b-9 人末端補體復(fù)合物C5b-9 規(guī)格： 48T/96T
ponticulin 人膜橋蛋白 規(guī)格： 48T/96T
ANX-Ⅴ 人膜聯(lián)蛋白Ⅴ 規(guī)格： 48T/96T
MAC 人膜攻擊復(fù)合物 規(guī)格： 48T/96T
MCP/CD46 人膜輔蛋白 規(guī)格： 48T/96T
MIS/AMH 人繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素 規(guī)格： 48T/96T
IAP 人免疫抑制酸性蛋白 規(guī)格： 48T/96T
IgHV 重鏈可變區(qū) 規(guī)格： 48T/96T
IgH 重鏈 規(guī)格： 48T/96T
ILTsR/LIR/CD85 樣轉(zhuǎn)錄體受體 規(guī)格： 48T/96T
λ-IgLC 輕鏈lambda 規(guī)格： 48T/96T
κ-IgLC 輕鏈kappa抗體 規(guī)格： 48T/96T
IgM M 規(guī)格： 48T/96T
Ig-j j鏈 規(guī)格： 48T/96T
IgG G 規(guī)格： 48T/96T
BY4741 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50? Fcγ G Fc片段 規(guī)格： 48T/96T
FcγRⅢ/CD16 G Fc段受體Ⅲ 規(guī)格： 48T/96T
FcγRⅡ/CD32 G Fc段受體Ⅱ 規(guī)格： 48T/96T
