上海博湖生物科技有限公司
主營產(chǎn)品: 高密度脂蛋白ELISA檢測試劑盒,同型半胱氨酸ELISA檢測試劑盒,游離脂肪酸ELISA檢測試劑盒 |
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18117197628
公司信息
參考價 | ¥2620.8 |
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型號
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品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
1ml(30mg/ml) | 2620.8元 | 15 盒 可售 |
更新時間:2023-11-09 20:10:52瀏覽次數(shù):580
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公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!
商品屬性
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
P-PR1061 | NHS活化磁珠 | 1ml(30mg/ml) |
NHS-Activated Magnetic Beads 是均勻的,表面覆蓋有高密度NHS(N-羥基琥珀 酰亞胺) 官能團的磁珠。磁珠通過形成穩(wěn)定的酰胺鍵方式,快速、高效的共價結(jié)合任何含有伯胺的配 體(圖 1)。本款磁珠可以在偶聯(lián)條件下快速完成反應(yīng)(室溫 pH 6.5-9 下 15-30 分 鐘,4℃ 下 4 小時),且不需要危險化學(xué)品。 NHS-activated Magnetic Beads 適于結(jié)合大分子蛋白。 Long-arm NHS-activated Magnetic Beads 被推薦用于結(jié)合小肽分子, 因為其長臂(21-原子) 的親水連接基團可以減少位阻現(xiàn)象。 NHS-activated Magnetic Beads 可以地作為親和樹脂進(jìn)行親和純化,將分子、 細(xì)胞和 部分細(xì)胞提取物進(jìn)行提煉純化。在與配體結(jié)合后,將磁珠添加到含有目標(biāo)分子的樣品中,然 后混合、孵育、洗滌和洗脫目標(biāo)分子(圖2)。
產(chǎn)品特點及優(yōu)勢:
·預(yù)活化即用型磁珠
·便于使用
·在pH7.4,4℃-25℃條件下可以快速偶聯(lián)
·穩(wěn)定的共價鍵,低水平的配體泄漏
·可重復(fù)使用的免疫親和基質(zhì)
·極低的非特異性結(jié)合率
·用途:用于純化抗體,蛋白質(zhì)/肽,DNA / RNA;細(xì)胞篩選、免疫沉淀
操作步驟
提示:
強烈建議在實驗過程中進(jìn)行滴定優(yōu)化,以確定每個實驗中應(yīng)用的磁珠數(shù)量。該協(xié)議可以相應(yīng)地放大和縮小。避免使用含有 tris 或其他含有伯胺類試劑的緩沖液,因為它們與預(yù)期的偶聯(lián)反應(yīng)競爭。
1.將適量的珠子轉(zhuǎn)移到離心管中。將管放在磁力分離器上 1-3 分鐘。當(dāng)磁珠沉淀時, 去除上清液。
2.取下試管,加入 5 倍磁珠溶液體積的 PBS 緩沖液,通過震蕩重新懸浮磁珠,渦旋 30 秒。將試管至于室溫環(huán)境 1-3 分鐘,再將管放在磁力分離器上 1-3 分鐘。當(dāng)磁珠沉淀 時,去除上清液。
3.重復(fù)步驟 2 兩次。
4.向含有目標(biāo)蛋白質(zhì)的粗樣品中添加洗滌過的磁珠,并在室溫或所需溫度下溫浴 1-2 小時 (溫度越低,培養(yǎng)時間越長)。提示:強烈建議進(jìn)行滴定實驗以優(yōu)化培養(yǎng)時間。因為孵化 的時間太長可能會導(dǎo)致很高的背景。
5.用 5 倍磁珠體積的 PBS 緩沖液或 1M NaCl 清洗磁珠,直到 280nm 處洗脫液的吸 光度接近背景水平(OD 280<0.05)。提示:添加更高濃度的鹽、非離子洗滌劑和還原劑也 可能會降低非特異性背景。例如,向洗滌緩沖液中添加 NaCl(濃度為 1-1.5 M)、0.1-0.5% 的非離子洗滌劑,如 TritonX-100 或 Tween-20,以及還原劑,如 DTT 或 TCEP(我們通 常使用 3mM)。 6.通過適當(dāng)?shù)姆椒ǎ绲?pH(2-4)、高 pH(10-12)、高鹽、高溫、親和洗脫或 SDS-PAGE 上樣緩沖液中煮沸,洗脫目標(biāo)蛋白。
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