【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：產(chǎn)氣莢膜梭菌核酸快速檢測試劑盒
英文名稱：Rapid Detection kit for Clostridium perfringens
【包裝規(guī)格】24測試/盒
【產(chǎn)品編號】KJD03L
【產(chǎn)品簡介】
本試劑盒基于環(huán)介導(dǎo)的恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)，用于食品和水體中產(chǎn)氣莢膜梭菌的快速檢測，并借助顯色指示劑直接判讀結(jié)果。
【檢測原理】
利用兩對特殊引物和具有鏈置換活性的Bst DNA聚合酶，使模板兩端引物結(jié)合處循環(huán)出現(xiàn)環(huán)狀單鏈結(jié)構(gòu)，引物順利與模板結(jié)合并進(jìn)行鏈置換擴(kuò)增反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)在恒溫條件下(60-65℃)進(jìn)行連續(xù)快速擴(kuò)增。反應(yīng)加入顯色指示劑，陰陽性結(jié)果顯色差異顯著，可直接通過顏色變化判讀結(jié)果。
【產(chǎn)品特點(diǎn)】
1. 快速簡便：將酶、引物等反應(yīng)組分混勻后進(jìn)行干粉化處理，增加試劑穩(wěn)定性，使用時減少溶液配制步驟，更為便捷，整個檢測反應(yīng)可在1 h內(nèi)完成;
2. 特異性高：利用靶基因序列上的多個獨(dú)立區(qū)域設(shè)計(jì)多條引物，保證擴(kuò)增反應(yīng)的高度特異性;
3. 靈敏度高：檢驗(yàn)限達(dá)到11 CFU/Test;
4. 判讀簡單：反應(yīng)前加入顯色指示劑，反應(yīng)后通過肉眼觀察反應(yīng)液顏色變化或者經(jīng)熒光監(jiān)測儀器跟蹤熒光圖譜的變化判讀結(jié)果，直觀方便，且可有效避免反應(yīng)后開蓋造成的氣溶膠污染。
【產(chǎn)品組分】
組分名稱規(guī)格×數(shù)量
檢測試劑（凍干）3排× 8管
復(fù)溶液650 μL × 1管
陽性對照（凍干）1管
陰性對照（凍干）1管
裂解液1 mL × 1管
顯色指示劑80 μL×1管
超純水1 mL×1管
說明書1份
【儲存條件與保質(zhì)期】
2~8℃條件下儲存，有效期為12個月
【適用儀器】
1. PCR儀器或金屬浴恒溫器，如果檢測樣品為DNA樣品，水浴鍋即可。
2. 高速離心機(jī)，樣品的前處理需要用高速離心機(jī)做分離。
【樣品富集】
1. 樣品前處理：取250 mL待檢水樣進(jìn)行抽濾，濾膜置于100 mL梭菌*進(jìn)行前增菌8-10 h，對增菌液中的菌體富集用于LAMP快速檢測。
2. 適用樣品類型：增菌液或者可疑菌落樣品。
3. 待測樣品存放：粗提的待檢DNA樣品保存于-4~0℃，不應(yīng)該超過24 h;利用試劑盒提取的DNA樣品可在-20℃長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
【使用指南】
1. 樣品前處理
A. 樣品增菌液模板DNA的制備：
a) 吸增菌液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中，6000 r/min離心5 min，棄上清;
b) 加入30 μL裂解液，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱10 min。
c) 12000 r/min離心15 min，上清即為粗提的DNA，可轉(zhuǎn)移至0.2 mL無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。
B. 可疑菌落模板DNA的制備：
挑取可疑菌落，懸浮到含30 μL裂解液的無菌離心管中，后按照上述步驟b)、c)操作。
2. 陰、陽性對照和干粉試劑復(fù)溶
A. 陰、陽性對照復(fù)溶
使用時，加入80 μL超純水至陽性對照和陰性對照凍干粉中，待溶解后混勻，-20℃存儲待用。
B. 干粉試劑復(fù)溶
取出凍干粉試劑，按照需求剪取n個檢測試劑管(n=待檢測樣品數(shù)+1管陽性對照+1管陰性對照)，每管加入20 μL復(fù)溶液，*溶解后待用。
3. 擴(kuò)增反應(yīng)
A. 打開能夠提供恒溫條件的儀器，設(shè)置到64℃待用;
B. 向上述已加入復(fù)溶液的n個反應(yīng)管中各加入顯色指示劑2.5 μL;
C. 向上述已加入復(fù)溶液的n個反應(yīng)管中分別加入待測樣品核酸、陰性對照、陽性對照各2.5 μL，蓋緊蓋子;
D. 將所有的反應(yīng)管置于恒溫儀器中，恒溫64℃反應(yīng)50 min。
4. 結(jié)果判讀
反應(yīng)結(jié)束后，建議在自然光線充足的環(huán)境條件下，將樣品置于白色背景下觀察結(jié)果，陰性對照檢測試劑管呈淡橙色，陽性對照檢測試劑管呈熒光綠，待測樣品反應(yīng)管以此作為對照進(jìn)行判讀，若陰陽對照反應(yīng)管任一結(jié)果與上述情況不符，則本次檢測結(jié)果無效，應(yīng)重新檢測或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。
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