SDS-PAGE濃縮膠緩沖液(4×)產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
本試劑為配制SDS-PAGE濃縮膠緩沖液,可用于配制各種濃度的變性及非變性PAGE凝膠,方便、快捷。產(chǎn)品中已加入10%SDS,使用時(shí)不用另外加入。
操作步驟(僅供參考):
根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度,膠濃度請(qǐng)參考附表1。
(一)灌制分離膠(各試劑使用量請(qǐng)參考附表2)
1、參照凝膠模具說明書,裝配好凝膠模具。(注:加入上層篩板有助于加樣時(shí)保持填料與樣品均勻接觸,是否加入上層篩板可根據(jù)實(shí)際情況選擇。)
2、將不同體積的Acr-Bis(30%,29:1)、分離膠緩沖液和蒸餾水在小燒杯或試管中混合。
3、加入10%APS和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產(chǎn)生氣泡。
4、在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對(duì)于mini-gel,凝膠液加至約距前玻璃板頂端
1.5 cm或距梳齒約0.5cm即可),然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1~2cm的水層,
使凝膠表面保持平整。
6、 靜置30~60min,待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后,表面凝膠已聚合。
(二)灌制濃縮膠(各試劑使用量請(qǐng)參考附表3)
1、小心傾倒出覆蓋在分離膠上的水層。
2、將不同體積的Acr-Bis(30%,29:1)、濃縮膠緩沖液和蒸餾水在一個(gè)小燒杯或試管中混
合。
3、加入10%APS和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產(chǎn)生氣泡。
4、將濃縮膠溶液加至分離膠的上面,直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端。
5、將梳子插入凝膠內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。
6、靜置10~20min,等待濃縮膠聚合。
7、待凝膠聚合后,小心地拔出梳子,以免破壞加樣孔。
8、進(jìn)行常規(guī)電泳操作。
SDS-PAGE濃縮膠緩沖液(4×)注意事項(xiàng):
1、 配制成10%溶液后應(yīng)當(dāng)-20℃保存。應(yīng)盡量減少室溫存放時(shí)間以防失效。有效避免失效的方法是分成小份,-20℃保存,用2~3次,剩余的棄用,亦可4℃保存幾天。
2、 TEMED易揮發(fā),使用后請(qǐng)蓋緊瓶蓋。另外凝膠凝聚的速度和溫度及光照關(guān)系密切,可通過適當(dāng)調(diào)節(jié)TEMED的用量,控制在不同的室內(nèi)環(huán)境下凝膠凝聚的速度。
3、 配制聚凝膠的過程中,如果室溫較低,可以置于37℃放置,加速凝固。
4、 Acr-Bis(30%,29:1)有輕微神經(jīng)毒性,請(qǐng)小心操作。
5、 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。