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亞鐵含量檢測(cè)試劑盒亞鐵嗪比色法,微板法

亞鐵含量檢測(cè)試劑盒亞鐵嗪比色法,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 亞鐵含量（亞鐵嗪比色法）檢測(cè)試劑盒說明書 （貨號(hào)：WS7121F 分光法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 亞鐵即二價(jià)鐵可與亞鐵嗪生成紫紅色化合物，該有色物質(zhì)在 562nm 處有特征吸收峰， 進(jìn)而計(jì)算得出亞鐵含量。適用于檢測(cè)組織、血清等樣品中的亞鐵含量。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 26mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉體×2 支 4℃保存 用前甩幾下或離心使粉體落入底部，每支 再加入 1.2mL 的蒸餾水溶解備用。 試劑三 液體 2mL×1 支 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 液體 1mL×1 支 4℃保存 臨用前用試劑三稀釋 50 倍(即取 10μL 的 標(biāo)準(zhǔn)品至 EP 管中，再加 490μL 的試劑三)， 制備成 2μg/mL 的亞鐵標(biāo)準(zhǔn)品。 三、所需儀器和用品： 可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、可調(diào)式移液器、離心機(jī)、蒸餾水。 四、亞鐵含量檢測(cè)： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí) 驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、 樣本制備： ① 組織樣本： 取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進(jìn)行冰浴勻漿。4℃×12000rpm 離心 5min，取 上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取。 ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（104）：提取液(mL)為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：澄清的液體可直接檢測(cè)；若渾濁則離心后取上清液檢測(cè)。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，設(shè)定波長到 562nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 所有試劑解凍至室溫，在 EP 管中依次加入：本試劑盒僅供科研使用 2 【注】：若 A 測(cè)定管大于 0.8，可用蒸餾水對(duì)樣本上清液進(jìn)行稀釋，稀釋倍數(shù) D 代入計(jì)算公式。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、按照組織質(zhì)量計(jì)算： 亞鐵含量(μg/g)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(V1÷V×W)×D =2×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白) ÷W×D 亞鐵含量(nmol/g)= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(V1÷V×W) ×103÷Mr×D =35.81×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白) ÷W×D 2、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算： 亞鐵含量(μg/104 cell)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(V1÷V×細(xì)胞數(shù)量) ×D =2×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白) ÷細(xì)胞數(shù)量×D 亞鐵含量(nmol/104 cell)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷(V1÷V×細(xì)胞 數(shù)量) ×103÷Mr×D =35.81×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白) ÷細(xì)胞數(shù)量×D 3、按照液體體積計(jì)算： 亞鐵含量(μg/mL)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷V1×D =2×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D 亞鐵含量(μmol/L)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷V1×103÷Mr×D =35.81×(A 測(cè)定-A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D C 標(biāo)準(zhǔn)---鐵標(biāo)品濃度，2μg/mL； V1---加入樣本體積，0.24mL； V---提取液體積，1mL； W---樣本取樣質(zhì)量，g； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； Mr---亞鐵分子量，55.847。 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 標(biāo)準(zhǔn)管 （僅做一次） 空白管 （僅做一次） 樣本 240 標(biāo)準(zhǔn)品 240 蒸餾水 240 試劑一 520 520 520 試劑二 40 40 40 充分混勻，置室溫 15min 后，若渾濁則需 3000rpm 離心 5min 后取全部上清液至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中，于波長 562nm 處讀取各管吸光度 A。