| 上海宇淳生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑 |
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| 參考價(jià) | ￥570-￥1030 |
-
型號(hào)
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 48T | 570元 | 1 盒 可售 |
| 96T | 1030元 | 1 盒 可售 |
更新時(shí)間：2024-06-03 10:40:34瀏覽次數(shù)：248
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谷an酰胺合成酶(GS)試劑盒,微板法
谷an酰胺合成酶(GS)試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 谷胺酰胺合成酶（Glutamine synthetase，GS）試劑盒說(shuō)明書 （貨號(hào)：WS1040W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 谷胺酰胺合成酶（GS，EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶之一，植物吸收的 無(wú)機(jī)氮經(jīng)硝酸還原酶（NR）和亞硝酸還原酶（NIR）還原成 NH4+后，通過(guò)谷胺酰胺合成酶（GS）參與的 GS/GOGAT 途徑才能進(jìn)行氮素的同化和利用。 谷胺酰胺合成酶（GS）在 ATP 和 Mg2+存在下，催化銨離子和谷*酸合成*氨酰胺；谷*酰胺進(jìn)一步轉(zhuǎn) 化為γ─谷氨酰基異羥肟酸，在酸性條件下形成的絡(luò)合物在 540nm 處有吸收峰，進(jìn)而得到谷胺酰胺合 成酶（GS）的酶活性大小。 二、試劑盒的組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體120mL×1瓶 4℃保存 試劑一 液體 34mL×1 瓶 4℃保存 臨用前 37℃預(yù)熱 10min，充分混勻 試劑二 液體 34mL×1 瓶 4℃保存 臨用前 37℃預(yù)熱 10min，充分混勻 試劑三 粉劑 mg×2 瓶 -20℃保存 用前甩幾下或 4℃離心使試劑落入試管底 部，每瓶再加入 13mL 蒸餾水充分溶解待 用，仍-20℃保存。 試劑四 液體 45mL×1 瓶 4℃保存 [注]：粉劑量在 mg 級(jí)別，使用前用手甩幾次或者進(jìn)行離心，打開直接加入要求的試劑即可。 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。 四、谷胺酰胺合成酶（GS）活性測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進(jìn)行冰浴勻漿。12000rpm，4℃離心 10min，取 上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取。 ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌/細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液； 超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）， 12000rpm，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例提取。 2、 上機(jī)檢測(cè)： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 540nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管 樣本 200 200 試劑一 320 試劑二 320本試劑盒僅供科研使用 2 試劑三 120 120 混勻，37℃水浴 30min 試劑四 200 200 混勻，反應(yīng) 2min，8000rpm，4℃離心 10min，取 200μL 上清液 于 96 孔板中，540nm 處分別讀取吸光值 A，△A=A 測(cè)定管-A 對(duì) 照管（每個(gè)測(cè)定管須設(shè)一個(gè)對(duì)應(yīng)的對(duì)照管）。 【注】：若△A 值低于 0.005，可增加樣本加樣體積 V1（如由 200μL 增至 400μL，則試劑一和試 劑二相應(yīng)減少 120μL，試劑三相應(yīng)減少 80μL），保持反應(yīng)總體積不變?；蛟黾訕颖救?質(zhì)量 W（由 0.1g 增加到 0.2g 或更高）。則改變后的 V1 和 W 需代入公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、按樣本蛋白濃度計(jì)算： 單位定義：每毫克組織蛋白在每分鐘內(nèi)使 A540 吸光值變化 0.005 定義為一個(gè)酶活力單位。 GS(U/mg prot)=ΔA÷(Cpr×V1)÷0.005÷T =33.3×ΔA÷Cpr 2、按樣本鮮重計(jì)算： 單位定義：每克組織在每分鐘內(nèi)使 A540 吸光值變化 0.005 定義為一個(gè)酶活力單位。 GS(U/g 鮮重)=ΔA÷(W×V1÷V)÷0.005÷T =33.3×ΔA÷W 3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算： 單位定義：每百萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞在每分鐘內(nèi)使 A540 吸光值變化 0.005 定義為一個(gè)酶活力單位。 GS(U/104 cell)=ΔA÷0.005÷(500×V1÷V)÷T=0.07×ΔA V----加入提取液體積，1 mL； V1----加入樣本體積，0.2mL； T----反應(yīng)時(shí)間，30 min； W----樣本質(zhì)量，g； 500----細(xì)胞數(shù)量，百萬(wàn)； Cpr----樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測(cè)試劑盒。
