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土壤淀粉mei試劑盒,微板法
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土壤淀粉mei試劑盒,微板法
土壤中的淀*酶主要來(lái)自于微生物,是一種重要的酶制劑。淀*酶可水解淀粉產(chǎn)生還原 糖

土壤淀粉mei試劑盒,微板法

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本試劑盒僅供科研使用 1 土壤淀*酶(Soil Amylase,S-AL)試劑盒說(shuō)明書(shū) (貨號(hào):WS8130W 微板法 48 樣) 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介: 土壤中的淀*酶主要來(lái)自于微生物,是一種重要的酶制劑。淀*酶可水解淀粉產(chǎn)生還原 糖,本試劑盒采用 3,5-二硝基水楊酸與終產(chǎn)物還原糖反應(yīng)生成棕紅色物質(zhì),在 540nm 處有 特征吸收峰,進(jìn)而得到土壤淀*酶活性。 二、測(cè)試盒組成和配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 粉體 mg×1 4℃保存 臨用前加入 60ml 試劑二,80℃水浴, 攪拌至溶解,待用。 試劑二 液體 120mL×1 4℃保存 試劑三 液體 12mL×EP 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑 mg×1 4℃保存 若重新做標(biāo)曲,則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品: 酶標(biāo)儀、96 孔板、天平、水浴鍋、低溫離心機(jī)、甲苯。 四、土壤淀*酶(S-AL)活性檢測(cè): 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)! 1、樣本處理: 取新鮮土樣或風(fēng)干土壤,先粗研磨,過(guò) 40 目篩網(wǎng),待測(cè)備用。 【注】:土壤風(fēng)干,減少土壤中水分對(duì)于實(shí)驗(yàn)的干擾;土壤過(guò)篩,保證取樣的均勻細(xì)膩; 2、上機(jī)檢測(cè): ① 培養(yǎng):在 EP 管依次加入: 試劑(μL測(cè)定管 對(duì)照管 土樣(g0.1 0.1 甲苯 40 40 25℃靜置 15min 試劑一 1000 試劑二 1000 充分混勻,37℃培養(yǎng) 1h,12000rpm25℃離心 10min,上清液待用 ② 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)為 540nm③ 顯色反應(yīng):在 EP 管中依次加入: 上清液 200 200 試劑三 100 100 混勻,95℃水浴 5min,待冷卻后,取 200μL 96 孔板中, 540nm 處讀取吸光值 A,△A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。 【注】若A 在零附近徘徊,可增加土樣質(zhì)量(如增至 0.2g),或延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間(如增至 3h 或更長(zhǎng)), 則改變后的土樣質(zhì)量和反應(yīng)時(shí)間 T 代入公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算: 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:y = 2.5454x - 0.0704;x 為標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量(mg/mL,y A。本試劑盒僅供科研使用 2、酶活單位定義:每克土樣每小時(shí)催化生成 1μg 葡萄糖為一個(gè)酶活力單位。 S-AL(μg/h/g 土樣)=[(A+0.0704)÷ 2.5454×103×V]÷W÷T =408.6×(A+0.0704)÷W V---反應(yīng)總體積,1040μL=1.04mL; T--反應(yīng)時(shí)間,1h; W--土壤樣本實(shí)際取樣量,g; 附:標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過(guò)程: 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液(1mg/mL):從標(biāo)準(zhǔn)品管中稱量取出 2mg 至一新 EP 管中,再加 2mL 蒸餾水混勻溶解即 1mg/mL 的葡萄糖(母液需在兩天內(nèi)用且-20℃保存)。 2 把母液用蒸餾水稀釋成六個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品:0, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5. 0.6. 0.7.mg/mL。 也可根據(jù)實(shí)際樣本來(lái)調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 在顯色反應(yīng)階段,按照測(cè)定管加樣表操作,依據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。 2



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