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乙型肝炎病毒C型PCR試劑盒一種用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR，即qPCR (Quantitative PCR)或real-time PCR的高品質(zhì)預(yù)混液，主要用于cDNA和基因組DNA等的特異性超高靈敏度定量檢測(cè)。
BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, High ROX)使用SYBR Green I作為染料。SYBR Green I是一種結(jié)合于雙鏈DNA(double-strand DNA, dsDNA)雙螺旋小溝區(qū)域的綠色熒光染料。SYBR Green I在游離狀態(tài)下的熒光比較微弱，一旦與雙鏈DNA結(jié)合后，其熒光會(huì)大大增強(qiáng)。這樣通過(guò)檢測(cè)熒光強(qiáng)弱就可以定量檢測(cè)PCR過(guò)程中擴(kuò)增產(chǎn)生的雙鏈DNA的數(shù)量。
本產(chǎn)品使用的BeyoFast™ Taq DNA Polymerase是一種與抗體結(jié)合的高品質(zhì)熱啟動(dòng)酶，能夠?qū)崿F(xiàn)便捷高效的熱啟動(dòng)。BeyoFast™ Taq DNA Polymerase中的Taq酶與抗Taq酶的單克隆抗體相互結(jié)合，從而抑制了Taq酶的DNA聚合酶活性，這樣可以有效避免在低溫條件下由引物和模板DNA非特異性退火或引物二聚體引起的非特異性擴(kuò)增。在PCR反應(yīng)的預(yù)變性步驟中抗體會(huì)被加熱失活，這樣可以確保僅在預(yù)變性后才會(huì)把Taq酶的活性釋放出來(lái)，預(yù)變性之前不會(huì)發(fā)生DNA聚合反應(yīng)，從而大大提高了PCR反應(yīng)的特異性、靈敏度和定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
本產(chǎn)品包含了BeyoFast™ Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I熒光染料、穩(wěn)定劑和鎂離子等所有的通用組分，使操作更簡(jiǎn)單、使用更便捷。用戶只需自備引物、樣品DNA和去離子水即可。
乙型肝炎病毒C型PCR試劑盒含高濃度ROX，適用于需高濃度ROX作為校正染料的熒光定量PCR儀。ROX的作用是用于校正與PCR無(wú)關(guān)的熒光波動(dòng)，從而大限度減少孔間差異。這種差異可能由多種因素引起，如移液誤差及樣品蒸發(fā)等。不同的熒光定量PCR儀對(duì)ROX的要求不同，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際所用儀器選擇含高濃度ROX (High ROX)、低濃度ROX (Low ROX)或不含ROX的BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X)。通常含高濃度ROX的BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, High ROX)也可以用于不需要ROX或需要低濃度ROX的熒光定量PCR儀。常用儀器所需ROX類(lèi)型請(qǐng)參考如下表格。
添加ROX類(lèi)型 適用PCR儀
不需添加 Bio-Rad: CFX384, CFX96,MiniOpticon, iCycler IQ, MyiQ and iQ5;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex and realplex2 s;
Qiagen/Corbett Rotor-Gene: 6000;
Roche: LightCycler 480; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR
Low ROX ABI: 7500(Fast), ViiA 7, QuantStudio 6 and 7 Flex Systems;
Stratagene: Mx3000P, Mx3005P and Mx4000;
Qiagen/Corbett Rotor-Gene: 3000;
Bio-Rad/MJ: Chromo4, Opticon 2 and Opticon
High ROX ABI GeneAmp 5700; ABI PRISM 7000, 7700; ABI 7300, 7900HT(Fast);
ABI StepOne(Plus)
本產(chǎn)品如果用于常規(guī)的96孔板qPCR檢測(cè)(建議反應(yīng)體系為20μl)，每毫升本產(chǎn)品可以進(jìn)行100次檢測(cè)；如果用于常規(guī)的384孔板qPCR檢測(cè)(建議反應(yīng)體系為10μl)，每毫升本產(chǎn)品可以進(jìn)行200次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱 包裝
D7265-1ml BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, High ROX) 1ml
D7265-5ml BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, High ROX) 1ml×5
D7265-25ml BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, High ROX) 1ml×25
— 說(shuō)明書(shū) 1份
保存條件：
-20℃避光保存，一年有效； 4℃避光保存，一個(gè)月內(nèi)有效。盡量避免反復(fù)凍融。
注意事項(xiàng)：
使用前需確保整管試劑*融化，上下顛倒輕輕混勻后使用?；靹蜻^(guò)程中盡量避免產(chǎn)生氣泡。
注意引物退火溫度，當(dāng)退火溫度<60℃時(shí)，推薦使用三步法PCR擴(kuò)增。
本產(chǎn)品中含有SYBR Green I熒光染料，保存本產(chǎn)品或設(shè)置PCR反應(yīng)時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光照射，以盡量避免熒光淬滅問(wèn)題。
對(duì)于超過(guò)350bp或者高GC含量的擴(kuò)增片段，建議增加延伸時(shí)間至60秒或者采用三步法以提高擴(kuò)增效率。
經(jīng)測(cè)試，本產(chǎn)品反復(fù)凍融10次對(duì)使用效果無(wú)顯著影響。但仍需盡量避免反復(fù)凍融本產(chǎn)品，反復(fù)凍融可能使產(chǎn)品性能下降。
qPCR檢測(cè)是超高靈敏度的檢測(cè)，PCR反應(yīng)設(shè)置區(qū)域需盡量避免各種可能的待擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。PCR產(chǎn)物宜密封后丟棄，以避免超高濃度的PCR產(chǎn)物污染實(shí)驗(yàn)環(huán)境。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。