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上海雅吉生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 培養(yǎng)原代細(xì)胞,細(xì)胞系價(jià)格,耐藥細(xì)胞株,實(shí)時(shí)熒光pcr試劑盒 |
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- 網(wǎng)址：
- www.yajimall.com
| 參考價(jià) | ￥ 526 |
| 訂貨量 | 1 |
- 型號(hào)
- 品牌
- 廠(chǎng)商性質(zhì) 生產(chǎn)商
- 所在地 上海市
更新時(shí)間：2019-07-24 14:28:00瀏覽次數(shù)：449
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
1. 細(xì)胞線(xiàn)粒體分離試劑盒(Tissue Mitochondria Isolation Kit)是用于快速分離培養(yǎng)細(xì)胞線(xiàn)
粒體的試劑盒。
2. 本試劑盒在分離線(xiàn)粒體的同時(shí)可以獲得去除線(xiàn)粒體的細(xì)胞漿蛋白，可用于研究細(xì)胞色素c等
線(xiàn)粒體蛋白向胞漿的釋放。
3. 使用本試劑盒分離獲得的線(xiàn)粒體純度較高，并且絕大部分分離獲得的線(xiàn)粒體都含有完整的內(nèi)
膜和外膜，并具有線(xiàn)粒體的生理功能。因此本試劑盒分離得到的線(xiàn)粒體可以用于線(xiàn)粒體的生
理功能等方面的研究。
4. 本試劑盒分離得到的線(xiàn)粒體也可以被試劑盒中的線(xiàn)粒體裂解液或其它適當(dāng)裂解液裂解后用
于SDS-PAGE、Western、雙向電泳等蛋白分析。
細(xì)胞線(xiàn)粒體分離試劑盒使用方法:
1. 準(zhǔn)備溶液：室溫融解試劑盒中的各種溶液，溶解后立即置于冰上并混勻。如果終目的是制
備線(xiàn)粒體蛋白，根據(jù)樣品數(shù)量，取適量相應(yīng)的線(xiàn)粒體分離試劑備用，在線(xiàn)粒體分離試劑加入
到細(xì)胞樣品中前數(shù)分鐘內(nèi)加入1:100稀釋的酶抑制劑。取適量線(xiàn)粒體裂解液備用，在線(xiàn)粒體裂
解液加入到線(xiàn)粒體樣品中前數(shù)分鐘內(nèi)加入1:100稀釋的酶抑制劑。
2. 從組織中分離線(xiàn)粒體：
3. 使用新鮮的動(dòng)物組織，通常要求動(dòng)物處死后不超過(guò)一小時(shí)，并且保存在冰上的組織。請(qǐng)勿使
用經(jīng)過(guò)冷凍保存的組織。
4. 剪取一小塊組織，重量約為50-100mg。在1.5ml離心管內(nèi)對(duì)剪取的組織進(jìn)行稱(chēng)重。用PBS洗滌
組織一次。
5. 把組織放在一個(gè)置于冰上的離心管或培養(yǎng)皿中，用剪刀或刀片把組織剪切成非常細(xì)小的組織
碎片。
6. 加入10體積預(yù)冷的線(xiàn)粒體分離試劑A或臨用前添加了1:100稀釋的酶抑制劑的線(xiàn)粒體分離試劑
A，在冰浴上進(jìn)行勻漿，勻漿10次左右。
注：如果組織的重量為50mg，可以大致認(rèn)為組織的體積接近50微升，此時(shí)需加入500微升線(xiàn)
粒體分離試劑A。
7. 把勻漿在600g，4℃離心5分鐘。
注：如需獲得純度更高的線(xiàn)粒體，可以將此步驟的離心速度改為1000g，其它離心條件不變；
獲得更高純度線(xiàn)粒體的缺點(diǎn)是相同數(shù)量細(xì)胞的線(xiàn)粒體抽提得率會(huì)下降。
8. 小心把上清轉(zhuǎn)移到另一離心管中，在11000g，4℃離心10分鐘。
注：如需獲得純度更高的線(xiàn)粒體，可以將此步驟的離心速度改為3500g，其它離心條件不變；
獲得更高純度線(xiàn)粒體的缺點(diǎn)是相同數(shù)量細(xì)胞的線(xiàn)粒體抽提得率會(huì)下降。
9. 小心去除上清。沉淀即為分離得到的線(xiàn)粒體。
注：如果希望獲得去除線(xiàn)粒體的細(xì)胞漿蛋白，在本步驟需收集上清，并且在收集上清時(shí)注意
勿觸及沉淀。隨后把收集的上清12000g，4℃離心10分鐘。取上清即為去除線(xiàn)粒體的細(xì)胞漿
蛋白。
10. 如果用于線(xiàn)粒體的蛋白分析，初始重量為50-100mg的組織樣品分離得到的線(xiàn)粒體樣品中可以
加入150-200微升臨用前添加了1:100稀釋的酶抑制劑的線(xiàn)粒體裂解液裂解線(xiàn)粒體。裂解后的
線(xiàn)粒體可以用于PAGE、Western、IP以及線(xiàn)粒體中的一些酶活性的測(cè)定等。裂解后的蛋白樣
品可以使用BCA法測(cè)定蛋白濃度。
11. 如果用于雙向電泳，請(qǐng)使用適當(dāng)?shù)挠糜陔p向電泳的裂解液處理線(xiàn)粒體。
注意事項(xiàng)：
1. 使用說(shuō)明中的操作步驟按照組織重量為50-100mg進(jìn)行說(shuō)明，如果組織塊較大，可以按比例加大各
溶液的使用量。
2. 分離線(xiàn)粒體的所有步驟均需在冰上或4℃進(jìn)行，所用溶液需冰浴或4℃預(yù)冷。
3. 通常在分離線(xiàn)粒體時(shí)前后兩次離心速度選取600g和11000g，如果希望純度更高，但對(duì)線(xiàn)粒體的得
率要求不高，前后兩次離心速度可以采用1000g和3500g。
4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
