技術(shù)文獻(xiàn)分享-ELISA試劑盒細(xì)節(jié)要求

　　◆ELISA需要遵循的幾個(gè)細(xì)節(jié)要點(diǎn)：

　　1、抗原或抗體能吸附于固相載體表面，并保持其免疫學(xué)活性;

　　2、抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;

　　3、酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，可根據(jù)已知濃度的抗原或抗體的顏色反應(yīng)的深淺繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并依此計(jì)算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。

　　◆注意事項(xiàng)：

　　1、標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。保存過久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底加深。

　　2、凍結(jié)標(biāo)本溶解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛混合，不要在混勻器上強(qiáng)烈震蕩。

　　3、渾濁或有沉淀的標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。

　　4、反復(fù)凍融會(huì)使蛋白效價(jià)降低，所以代測樣本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。

　　除了以上內(nèi)容，在ELISA試劑盒細(xì)節(jié)中，稀釋前、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗(yàn)的均一性。

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