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南京億迅生物科技有限公司
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線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性檢測(cè)試劑盒
| 參考價(jià) | ￥ 1710 | ￥ 1280 |
| 訂貨量 | 1 件 | 5 件 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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- 所在地 南京市
更新時(shí)間：2019-11-07 11:08:15瀏覽次數(shù)：424
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線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性檢測(cè)試劑盒
測(cè)定原理
與氧化型細(xì)胞色素C不同，還原型細(xì)胞色素C在550nm有特征光吸收，因此550nm光吸收增加速率能夠反映線粒體復(fù)合體Ⅲ酶活性。
需自備的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一：25mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：5mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：0.5 mL×1支，-20℃保存；
試劑四：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑五：粉劑×1支，-20℃保存；
試劑六：液體2.5mL×1瓶，-20℃保存；
工作液的配制：將試劑五轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解。
線粒體復(fù)合體Ⅲ提取：
- 準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
- 將勻漿600g，4℃離心5min。
- 將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
- 上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅲ（此步可選做）。
- 在沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），用于復(fù)合體Ⅲ酶活性測(cè)定。
測(cè)定步驟：
- 調(diào)零 用蒸餾水于550nm處調(diào)零。
- 樣本測(cè)定
（1）取40μL樣本和800μL工作液于1mL玻璃比色皿中，在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）孵育5min。
（2）取出比色皿，加入100μL試劑六，混勻，立即記錄550nm處初始吸光值A1，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）中準(zhǔn)確反應(yīng)2min，記錄550nm處2min后的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性檢測(cè)試劑盒
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