檢測(cè)系統(tǒng)是用于免疫反應(yīng)研究和試劑盒生產(chǎn)的敏感技術(shù)，發(fā)揮著非常重要的作用。雖然小鼠熱休克因子1（HSF1）ELISA試劑盒操作過程看起來比較簡(jiǎn)單，但實(shí)驗(yàn)過程有很多要求。在實(shí)驗(yàn)室里，試劑的制備一般都不太重視。一般的做法是在實(shí)驗(yàn)過程中把試劑從冰箱里拿出來立即使用，而忽略了這種做法可能會(huì)影響后續(xù)孵化時(shí)間的問題。直接的結(jié)果是，對(duì)一些弱陽(yáng)性樣品的檢測(cè)出現(xiàn)假陰性。
因此，小鼠熱休克因子1（HSF1）ELISA試劑盒測(cè)定中的試劑準(zhǔn)備最重要的是在實(shí)驗(yàn)前將試劑盒從冰箱中取出，在室溫下放置20min以上，然后再進(jìn)行測(cè)定，使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的是為了使反應(yīng)微孔中的溫度在隨后的孵化反應(yīng)中迅速達(dá)到要求的高度，從而達(dá)到測(cè)定的要求。
目前，ELISA試劑盒中的洗板液在實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)需要通過稀釋提供的濃縮液來配制，所以稀釋用的蒸餾水或去離子水的質(zhì)量應(yīng)得到保證。當(dāng)試劑盒使用OPD作為底物時(shí)，應(yīng)在反應(yīng)和顯色前臨時(shí)制備底物溶液。其實(shí)，不僅是ELISA實(shí)驗(yàn)，每個(gè)試劑實(shí)驗(yàn)都是一樣的。它需要按照程序來操作。在使用前，一定要閱讀說明書，并對(duì)每個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行總結(jié)，這樣才能使實(shí)驗(yàn)更加完整、美觀。
小鼠熱休克因子1（HSF1）ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)如下。
1、正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別用陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待測(cè)樣品應(yīng)一式兩份，以保證試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)背景高，說明有非特異性反應(yīng)，可用羊血清、兔血清或BSA封存。
2、在ELISA中，選擇各種實(shí)驗(yàn)條件是很重要的，包括。
（1）固體載體的選擇。許多物質(zhì)可以作為固體載體，如PVC、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺和纖維素。它的形式可以是凹板、試管、珠子等。目前，常用的是40孔聚苯乙烯凹板。無論哪種載體，在使用前都可以進(jìn)行篩選：涂上等量的抗原，在相同的實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顏色反應(yīng)是否均勻，從而判斷其吸附性能是否良好。
（2）包被抗體（或抗原）的選擇?？贵w（或抗原）在固體載體表面吸附時(shí)，要求其純度好，PH值一般要求在9.0～9.6之間。吸附溫度、時(shí)間和蛋白質(zhì)含量也有一定影響。一般情況下，4℃下使用18-24小時(shí)。蛋白質(zhì)包衣的濃度需要滴定：即不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μG/ml等），在其他試驗(yàn)條件相同的情況下，觀察陽(yáng)性樣品的OD值。選擇OD值大而蛋白質(zhì)少的濃度。通常1～10為大多數(shù)蛋白質(zhì)μg／ml。
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