抗人生長(zhǎng)因子（GF）抗體（HRP標(biāo)記穩(wěn)定分泌抗人胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（hIGF-1）單克隆抗體（mAb）的雜交瘤細(xì)胞系,并對(duì)其分泌的mAb進(jìn)行鑒定.方法:用純化后的hIGF-1重組蛋白免疫Balb/c小鼠,利用雜交瘤細(xì)胞融合技術(shù)制備抗hIGF-1的mAb,用Western blot法鑒定mAb的特異性,用間接ELISA法檢測(cè)mAb腹水效價(jià)及mAb的親和力,雜交瘤細(xì)胞染色體分析,鑒定Ig亞類。
抗人生長(zhǎng)因子（GF）抗體（HRP標(biāo)記）說明書
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名 稱：抗人生長(zhǎng)因子（GF）抗體（HRP標(biāo)記）。
目 錄 號(hào)：YP100113
亞 型：IgG
緩 沖 液：0.01mol/L的PBS、pH：7.2、0.2%Procline-300。
免 疫 原：人生長(zhǎng)因子（GF）。
制備方法：取健康BALB/C小鼠單抗腹水。
純化方法：親和純化。
標(biāo)記方法：HRP偶聯(lián)標(biāo)記
應(yīng)用范圍：適用于ELISA、CLIA、WB、IHC、流式等實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品純度：不低于總蛋白的95%。
儲(chǔ)存方法：存放在-20℃。
注意事項(xiàng)：避免反復(fù)凍融。
有效期限：請(qǐng)您在管體注明有效期內(nèi)使用。
使用建議：本產(chǎn)品可以用于免疫學(xué)反應(yīng)相關(guān)實(shí)驗(yàn)，更多信息請(qǐng)咨詢技術(shù)人員。
抗人生長(zhǎng)因子（GF）抗體（HRP標(biāo)記）制備穩(wěn)定分泌抗人胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(hIGF-1)單克隆抗體(mAb)的雜交瘤細(xì)胞系,并對(duì)其分泌的mAb進(jìn)行鑒定。方法:用純化后的hIGF-1重組蛋白免疫Balb/c小鼠,利用雜交瘤細(xì)胞融合技術(shù)制備抗hIGF-1的mAb,用Western blot法鑒定mAb的特異性,用間接ELISA法檢測(cè)mAb腹水效價(jià)及mAb的親和力,雜交瘤細(xì)胞染色體分析,鑒定Ig亞類。結(jié)果:獲得2株能穩(wěn)定分泌抗hIGF-1的mAb雜交瘤細(xì)胞系,Western blot分析顯示,該mAb能與具有生物學(xué)活性的成熟IGF-1蛋白結(jié)合。腹水mAb效價(jià)可達(dá)6×104。mAb相對(duì)親和力為2.1×109/mol～7.8×109/mol。2株單抗屬IgM亞類。染色體分析符合雜交瘤細(xì)胞特征。結(jié)論:成功制備出抗hIGF-1的2株mAb雜交瘤細(xì)胞,為進(jìn)一步用于hIGF-1的臨床檢測(cè)和實(shí)驗(yàn)研究創(chuàng)造了條件。制備抗人神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor,NGF)的單克隆抗體(monoclonal antibody,mAb)，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行初步鑒定，為臨床上的預(yù)防和治療提供研究基礎(chǔ)。 [方法]以人胎盤提純的NGF作為免疫原，經(jīng)皮下、腹腔免疫6～8周雌性Balb/c小鼠。采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)，將免疫鼠的脾臟細(xì)胞與同系動(dòng)物的骨髓瘤細(xì)胞sp2/0進(jìn)行融合。運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)對(duì)雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)上清進(jìn)行特異性抗體的檢測(cè)。采用有限稀釋法對(duì)陽性分泌孔的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行多次篩選和克隆化培養(yǎng)，獲取穩(wěn)定分泌特異性mAb的雜交瘤細(xì)胞株。取生長(zhǎng)良好的雜交瘤進(jìn)行染色體的數(shù)目分析?？焖俣ㄐ栽嚰埛ㄨb定單抗的類型。體內(nèi)誘生腹水法進(jìn)行單抗的制備。Protein G免疫親和層析法進(jìn)行單抗的純化。以PC12為靶細(xì)胞，觀察和分析抗人NGF單克隆抗體對(duì)該細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的影響。 [結(jié)果]本研究獲得兩株可分泌特異性抗人NGF單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為1F6和5E4。其生物學(xué)特性：①兩株細(xì)胞的染色體數(shù)目均為100以上，提示為雜交瘤細(xì)胞；②快速定性試紙法鑒定兩株mAb均屬小鼠IgG1亞類和κ型；③體內(nèi)腹水誘生方法生產(chǎn)單克隆抗體，腹水形成的陽性率為90％，每只小鼠腹水的產(chǎn)量平均為8.0ml；④Protein G免疫親和層析法純化后，1F6和5E4雜交瘤細(xì)胞株的腹水抗體蛋白的含量分別為2.0mg／ml和1.5mg／ml；⑤ELISA法分析表明，腹水型單抗的效價(jià)均在1：1000以上；⑥經(jīng)*體外傳代培養(yǎng)，雜交瘤生長(zhǎng)良好， 戎人禪經(jīng)全淺因廠‘萬6F少琪兌窟灰形功研御姿蘭勿筍舟蹬時(shí)研男 分泌抗體的性能穩(wěn)定;⑦實(shí)驗(yàn)表明，IF6和5E4可降低NGF促進(jìn)PC12細(xì)胞突起伸 長(zhǎng)的作用。 抗人生長(zhǎng)因子（GF）抗體（HRP標(biāo)記）。[結(jié)論]本研究己制備兩株分泌抗人NGF功能性單克隆抗體的雜交瘤，該單 抗的研制為深入研究NGF的生物學(xué)功能提供了重要的手段。研制抗人NGF單克隆 抗體的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是增強(qiáng)抗原的免疫原性、調(diào)整抗原的劑量、改變抗原的免疫途徑、 保持骨髓瘤細(xì)胞SpZ/0的活力、穩(wěn)定細(xì)胞融合溫度、避免細(xì)胞污染等。經(jīng)實(shí)驗(yàn)表 明，IF6和5E4單克隆抗體可降低NGF促進(jìn)PC12細(xì)胞突起伸長(zhǎng)的作用，具有抗NGF 的特性。 NGF在神經(jīng)系統(tǒng)和非神經(jīng)系統(tǒng)中具有廣泛的生理作用，研制抗人NGF單克隆抗 體，在臨床上具有重要的應(yīng)用價(jià)值。本文已在實(shí)驗(yàn)室獲得抗人NGF單克隆抗體， 并具有較好的生物學(xué)活性，但在臨床上如何應(yīng)用有待于進(jìn)一步的深入研究。
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