 |
伊萊博生物科技（上海）有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 動(dòng)物行為學(xué)檢測(cè),大中小型動(dòng)物實(shí)驗(yàn),細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù) |
會(huì)員.png)
聯(lián)系電話
15221734409
公司信息
- 聯(lián)系人：
- 張經(jīng)理
- 電話：
- 021-66010608
- 手機(jī)：
- 15221734409
- 傳真：
- 地址：
- 上海市寶山區(qū)長(zhǎng)江南路180號(hào)B區(qū)B650
- 郵編：
- 200439
- 個(gè)性化：
- www.yilaibohb.com
- 網(wǎng)址：
- www.shyilaibo.com/
| 參考價(jià) | ￥ 3000 |
| 訂貨量 | 1 臺(tái) |
- 型號(hào)
- 品牌
- 廠商性質(zhì) 其他
- 所在地 上海市
更新時(shí)間：2023-10-30 15:14:42瀏覽次數(shù)：1356
聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說明是環(huán)保在線上看到的信息，謝謝!
分子克隆與質(zhì)粒載體構(gòu)建
一、服務(wù)介紹
分子克隆是在分子水平上提供一種純化和擴(kuò)增特定DNA的片段的方法。常含有目的基因，用體外重組方法將它們插入克隆載體，形成重組克隆載體，通過轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式，引入適合的寄主體內(nèi)得到復(fù)制與擴(kuò)增，然后再?gòu)暮Y選的寄主細(xì)胞內(nèi)分離提純所需的克隆載體，可以得到插入DNA的許多拷貝，從而獲得目的基因的擴(kuò)增。
二、實(shí)驗(yàn)原理
外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組，這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA連接酶的作用下,有Mg2+、ATP存在的連接緩沖系統(tǒng)中，將分別經(jīng)酶切的載體分子與外源DNA分子進(jìn)行連接。DNA連接酶有兩種：T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶。兩種DNA連接酶都有將兩個(gè)帶有相同粘性末端的DNA分子連在一起的功能，而且T4噬菌體DNA連接酶還有—種大腸桿菌連接酶沒有的特性，即能使兩個(gè)平末端的雙鏈DNA分子連接起來。但這種連接的效率比粘性末端的連接效率低，一般可通過提高T4噬菌體DNA連接酶濃度或增加DNA濃度來提高平末端的連接效率。
T4噬菌體DNA連接酶催化DNA連接反應(yīng)分為3步：，T4DNA連接酶與輔助因子ATP形成酶—AMP復(fù)合物；然后，酶—AMP復(fù)合物再結(jié)合到具有5’磷酸基和3’羥基切口的DNA上，使DNA腺苷化；后產(chǎn)生一個(gè)新的磷酸二酯鍵，把切口封起來。
DNA重組的方法主要有粘端連接法和平端連接法，為了防止載體本身的自連，可以通過(牛小腸堿性磷酸酶)CIP處理克服。
連接反應(yīng)的溫度在37℃時(shí)有利于連接酶的活性.但是在這個(gè)溫度下，粘性末端的氫鍵結(jié)合是不穩(wěn)定的。因此人們找到了一個(gè)折中溫度，即12-16℃，連接12-16h(過夜)，這樣既可大限度地發(fā)揮連接酶的活性，又兼顧到短暫配對(duì)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。
三、實(shí)驗(yàn)流程
目的DNA的擴(kuò)增和純化；
連接反應(yīng)；
電泳檢測(cè)連接產(chǎn)物。
四、客戶提供
樣本DNA，基因序列，試劑盒。
五、公司提供
構(gòu)建好的載體，電泳膠圖，測(cè)序結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)周期：大約1-2月。
