 |
伊萊博生物科技（上海）有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 動(dòng)物行為學(xué)檢測(cè),大中小型動(dòng)物實(shí)驗(yàn),細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù) |
會(huì)員.png)
聯(lián)系電話
15221734409
公司信息
- 聯(lián)系人：
- 張經(jīng)理
- 電話：
- 021-66010608
- 手機(jī)：
- 15221734409
- 傳真：
- 地址：
- 上海市寶山區(qū)長(zhǎng)江南路180號(hào)B區(qū)B650
- 郵編：
- 200439
- 個(gè)性化：
- www.yilaibohb.com
- 網(wǎng)址：
- www.shyilaibo.com/
| 參考價(jià) | ￥0.9-￥1 | /件 |
-
型號(hào)
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
其他 -
所在地
上海市
更新時(shí)間：2024-03-22 17:37:51瀏覽次數(shù)：332
聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說(shuō)明是環(huán)保在線上看到的信息，謝謝!
1. SD大鼠，250g，通過(guò)頸椎脫位處死大鼠，浸入75%乙醇浸泡5分鐘，轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤(pán)中。
2. 打開(kāi)皮膚，暴露、收集股骨，無(wú)菌狀態(tài)下移除附著的肌肉和組織。
3. 并轉(zhuǎn)移股骨至預(yù)冷含雙抗的PBS中，洗滌三次。冰上操作。
4. 切斷股骨骨骺， 使用5mlPBS，1ml注射器針頭沖洗，沖洗液由棕色變成粉紅色即可（股骨變白）。沖洗后，用1ml注射器吹打3-5次。
5. 70um濾網(wǎng)過(guò)濾，棄去篩網(wǎng)。使用 15ml 離心管，先加入分離液，然后緩慢加入濾過(guò)的懸液。20℃環(huán)境下，600g 離心 25min。
6. 離心后，離心管中液體由上至下分為四層。第一層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。
7. 小心吸取離心管中的，環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層，轉(zhuǎn)移到新離心管中，加入 5-10ml 洗滌液，混勻細(xì)胞。400g，離心 10min。
8. 棄去上清，用吸管吸取 5ml 清洗液重懸所得細(xì)胞。 250g，離心 10min，棄去上清。 再用M199wq培養(yǎng)基（含10 ng/mL VEGF，1 ng/mL b-FGF，1 ng/mL EGF，20%胎牛血清、1%雙抗）清洗一次，棄去上清，M199wq培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。250g，離心 10min，棄去上清。M199wq培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)。
按3×106/孔種入纖連蛋白包被過(guò)的24孔板，每3天換一次培養(yǎng)基，以去除非貼壁細(xì)胞，持續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)2-3周。
