掌上離心機的離心分離方法仍然具有分離范圍廣、容量大等優(yōu)點;可研究天然生物大分子的水動力特性;生物大分子的片段分離可在電離介質(zhì)中進行;緩沖液限制很小(在電泳技術(shù)中,由于電流的熱效應(yīng),緩沖液的使用受到限制)。此外,離心仍然廣泛應(yīng)用于各種實驗方法的預(yù)處理階段??紤]到各個研究部門的設(shè)備分布,在很多情況下離心的使用是相當(dāng)廣泛的。差速離心率區(qū)密度梯度離心和等密度離心作為一種有效的分離純化方法,在生物大分子的研究中也發(fā)揮著重要作用。下面就來說說它的分離要點:
1、污染防治:
為避免生物大分子在實驗過程中部分損傷而引起的降解或變性,降解的原因有很多,如實驗過程中的外力;有些酶被污染等,但見的原因是酶的功能。在實驗過程中,由于樣品中混入了??一些脫氫酶,生物大分子發(fā)生了變性??。
2、避免變性
(1)掌上離心機離心前將旋轉(zhuǎn)頭預(yù)冷至接近離心溫度(在冰箱中放置過夜或在培養(yǎng)箱中保溫)。對于超速離心機來說,它的制冷系統(tǒng)主要是用來抵消旋轉(zhuǎn)頭在稀薄空氣中高速運轉(zhuǎn)時,旋轉(zhuǎn)頭表面的線速度從次原因速度到超原因速度時空氣動力摩擦產(chǎn)生的熱量。在真空中只有輻射傳熱的條件下,高速運轉(zhuǎn)的旋轉(zhuǎn)頭的溫度從常溫(如夏季30~35℃)長期下降至5℃(如1小時左右)。一般應(yīng)預(yù)冷至接近離心溫度(±2℃),以保證在離心初期(15分鐘內(nèi))旋轉(zhuǎn)頭溫度與樣品溫度一致。
(2)使用固定角度或近垂直管旋轉(zhuǎn)頭或垂直管旋轉(zhuǎn)頭進行梯度離心時,必須使用離心機的慢加速(0~500rpm)和慢減速(500rpm~0)功能,以保證平穩(wěn)梯度方向的轉(zhuǎn)換。
(3)掌上離心機在離心開始和結(jié)束時小心拿取離心管,避免振動過大。
(4)卸樣過程應(yīng)在無振動試驗臺上進行,環(huán)境溫度與離心溫度相近。卸樣方法應(yīng)穩(wěn)定,外力小,盡量不要用泵輸送樣品。