收到細(xì)胞如何處理？

1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。

大鼠支氣管成纖維細(xì)胞提取物【Rat Airway: Normal Bronchial Fibroblast Derivatives】
大鼠支氣管成纖維細(xì)胞提取物是從大鼠支氣管成纖維細(xì)胞提取的，大鼠支氣管成纖維細(xì)胞從正常大鼠支氣管組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠支氣管成纖維組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

p-Phenylenediamine sulfate19種VOC混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- HRPT2 antibody抗組蛋白抗體(AHA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

1,4-Benzenedimetha9種VOC混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- HRSP12 antibody脂酶A1(PLA1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

1,4-Butanediol dimethacrylate16種VOC混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- HS1BP3 antibody133kDa核孔蛋白(NUP133)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

1,4-BIS(2-HYDROXYETHYL)PIPERAZINE27種VOC混標(biāo)套裝 （煙草YC207-2014)anti- HS2ST1 antibody纖維蛋白原α(FGα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

DIMETHYL POPOP27種VOC混標(biāo)套裝 （煙草YC207-2014)anti- HS3ST1 antibody絲裂原激活蛋白激酶8(MAPK8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

1,4-Bis(dimethylsilyl)benzene27種VOC混標(biāo) （YC207-2014）（120988-15稀釋5倍）anti- HSBP1 antibody155kDa核孔蛋白(NUP155)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

1,4-Diiodobutane27種VOC混標(biāo) （YC207-2014）（120988-14稀釋2倍）anti- Hsc70 antibody四旋蛋白27(TSPAN27)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

NMR STD/40% P-DIOXANE/BENZENE-D6/4MM NAN27種VOC混標(biāo) （YC207-2014）（120988-13稀釋5倍）anti- Hsc70 antibody胱天蛋白酶10(CASP10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

大鼠支氣管成纖維細(xì)胞提取物Kluyveromyces marxianus (EC Hansen) van der ..細(xì)胞間粘附分子5抗體Goat MAP34 ELISA Kit酸二酯酶8A(PDE8A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Komagataella pastoris (Guilliermond) Yamada ..胰島素誘導(dǎo)基因2抗體Goat GBD1(Beta-defensin 1) ELISA Kit酸二酯酶8B(PDE8B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Sporoschisma saccardei Mason et Hughes, ana ..HHG2抗體Goat IL-4(Interleukin 4) ELISA Kit酸二酯酶9A(PDE9A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Salmonella enterica subsp.enterica (e ..DNA結(jié)合抑制因子4抗體Goat IL-5(Interleukin 5) ELISA Kit酸二酯酶10A(PDE10A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Homo sapiens, human胰島素樣生長因子2受體抗體Goat GH(Growth Hormone

) ELISA Kit酸二酯酶11A(PDE11A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Serratia marcescens Bizio鋅指蛋白Aiolos抗體Goat MT(Melatonin) ELISA Kit酸二酯酶12(PDE12)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Homo sapiens, human bone marrow/stroma肌醇聚酸鹽酸酶樣蛋白1抗體Goat TSH(Thyroid Stimulating Hormone

) ELISA Kit甘油酸二酯酸二酯酶1(GDE1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..干擾素α17抗體Goat LDH(L-Lactate Dehydrogenase) ELISA KitNebulette蛋白(NEBL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

公司產(chǎn)品采用干冰運(yùn)輸，經(jīng)過逐步的降溫，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暫時(shí)停止其生命活動，保存其活性，使您的實(shí)驗(yàn)更生動,公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

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