操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

人肺動脈組織提取物【Lung: Normal Human Pulmonary Artery Derivatives】
肺位于胸腔內(nèi)，主要包含內(nèi)皮，上皮，成纖維三種細胞。公司科技提供來自新鮮或冷凍人肺動脈組織中高質量的總RNA，PCR準備的一條cDNA鏈，蛋白質及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人肺動脈組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜。

注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

SILVER PERCHLORATE亞胺硫 標準品anti- liver Arginase antibody脂肪細胞型脂肪酸結合蛋白(FABP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

SODIUM PERMANGANATE滅草松 標準品anti- liver Arginase antibody白介素25(IL25)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

ZIRCONIUM N-BUTOXIDE滅草松 標準品anti- LKB1 antibody白介素26(IL26)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Telatinib滅草松 標準品anti- LMAN1 antibody血管內(nèi)皮生長因子165(VEGF165)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Ganciclovir五氯氧基苯 標準品anti- LMBR1L antibodyα1-抗(α1AT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

HEPTANOIC ANHYDRIDE五氯氧基苯 標準品anti- LMF1 antibody乳酸脫酶B(LDHB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

1A25-dihydroxycholecalciferol(+4℃)烯草酮 標準品anti- LMF2 antibody乳酸脫酶B(LDHB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

LITHIUM COBALT(III) OXIDE綠麥隆 標準品anti- LMNB2 antibody乳酸脫酶B(LDHB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

人肺動脈組織提取物Homo sapiens, human胞漿蘋果酸酶1抗體Human TNFAIP6(Tumor necrosis factor-inducible gene 6 protein) ELISA Kit動力蛋白胞漿1重鏈1(DYNC1H1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Streptomyces roseus (Krainsky) Pridham et a ..微粒體甘油三酯轉運蛋白Human AOC1(Amiloride-sensitive amine oxidase [copper-containing]) ELISA Kit皮屑蛋白樣蛋白1(LEPREL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Proteus mirabilis Hauser羥戊酸脫羧酶抗體Human MAOA(Amine oxidase [flavin-containing] A) ELISA Kit葡萄糖6酸異構酶(GPI)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Hyphomicrobium sulfonivorans Borodina et al.羥戊酸激酶抗體Human CTXI(Cross Linked C-telopeptide of Type I Collagen) ELISA Kit細胞因子信號轉導抑制因子3(SOCS3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Salmonella enterica subsp.enterica (e ..單酰甘油脂肪酶抗體Human GCK(Glucokinase) ELISA Kit神經(jīng)蛋白聚糖(NCAN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..微絲相關蛋白3樣抗體Human ANGPT4(Angiopoietin-4) ELISA Kit接觸蛋白關聯(lián)蛋白樣蛋白2(CNTNAP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..線粒體蛋白酸酶1抗體Human SLIT2(Slit homolog 2 protein) ELISA Kit溶質載體家族39成員6(SLC39A6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..酸化造血祖細胞激酶抗體Human F13A1(Coagulation factor XIII A chain) ELISA Kit細胞因子信號轉導抑制因子2(SOCS2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)