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產品名稱:塞皮克病毒PCR檢測試劑盒
英文名稱:Sepik VirusRTPCR
編號:XG-P2086
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
包裝規(guī)格及成分:
編號 | 成分 | 十孔盒包裝(去紙托) |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黃蓋) |
試劑二 | 源性成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白蓋) |
試劑三 | 源性成分 PCR 陽性對照 | 50 uL(黃蓋) |
試劑四 | 超純水 | 1 mL(本色蓋) |
試劑五 | DNA 釋放劑試用裝 | 50 次(成分見下) |
試劑六 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分一 | 50 uL(白蓋) |
試劑七 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分二 | 100uL(綠蓋) |
試劑八 | 免 DNA 提取試劑溶液 B | 400 uL(紅蓋) |
試劑九 | 使用手冊 | 400 uL(紅蓋) |
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線
腸道菌增菌肉湯(EE)2250g用于腸道菌的增菌培養(yǎng)
橙血清瓊脂 (CM0657) Oxoid incubation media 橙血清瓊脂 (CM0657) Oxoid
土生拉烏爾菌(土生克雷伯菌) 殺鱗翅目昆蟲 支/瓶
HB-PETAuto-IndectionMedium
細菌L型增菌液 65g 用于L型細菌增菌培養(yǎng)硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)試劑盒 進口分裝 50-27-1 Estriol C18H24O3 288.38 Steroids >=98% 20mg
BCA蛋白法含量測定試劑盒 進口分裝 572-31-6 Engeletin C21H22O10 434.4 Flavonoids >=98% 20mg
蔗糖酶試劑盒 進口分裝 92-61-5 Scopoletin C10H8O4 192.2 Coumarins >=99% 20mg
乙酸激酶(ACK)試劑盒 進口分裝 18085-97-7 Jaceosidin C17H14O7 330.29 Flavonoids >=98% 20mgTNFSF12 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 人 TNFSF12 人細胞裂解液 (陽性對照)
CM-M091小鼠成骨細胞*培養(yǎng)基100mL
成骨細胞培養(yǎng)基ObM-prf
HeLa229細胞,人細胞(HPV-18永生化細胞) 小鼠垂體瘤細胞,GT1-1細胞 真成纖維細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
HBE(人支氣管上皮樣細胞) 5×106cells/瓶×2
hMSC-AT Pellet 人體脂肪組織的間質干細胞團塊 > 1 mio.cells 人腎皮質上皮細胞總RNAHRCEpiC NA
塞皮克病毒PCR檢測試劑盒Acetamidebroth
假單菌瓊脂基礎培養(yǎng)基/CN瓊脂 CN Agar 用于銅綠假單菌的分離培養(yǎng)(濾膜法)
NBB瓊脂 NBB Agar 250克 啤酒中厭氧菌檢測
標準I號營養(yǎng)瓊脂250標準細菌計數(shù)、含糖(MERCK方法)incubationmedia標準I號營養(yǎng)瓊脂250標準細菌計數(shù)、含糖(MERCK方法)
沙門氏菌、志賀氏菌檢驗培養(yǎng)基標準溶液(100μg/ml,u=3%,基體:丙) 進口分裝 WPMY-1(人正常前列腺基質永生化細胞)
十二烷(標準品) 進口分裝 人退行性癌細胞
硫酸根離子(SO42-)標準溶液(5000mg/L,溶劑:水) 進口分裝 肝癌
優(yōu)級真空泵油(Viscosity Grade 68) 進口分裝 人腦膠質瘤細胞TF Others Sus scrofa (Pig) 野豬 ansferrin / TF 人細胞裂解液 (陽性對照)
MN-c, 小鼠皮質神經(jīng)元
大鼠雪旺氏細胞*培養(yǎng)基 100mL
UMNSAH/DF-1雞胚成纖維細胞 UMNSAH/DF-1 chicken embryo fibroblast DMEM培養(yǎng)基+10%FBS
IFNW1 Protein Human 重組人 Ierferon omega-1 / IFNω / IFNW1 蛋白 (Fc 標簽)
NCI-H209(人小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 MRC-5(胚肺細胞)
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
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