Protein G Magnetic Beads蛋白G磁珠

Protein G Magnetic Beads 是大小均勻，具有分散度的，表面共價綴合超純（純度>97％）的重組蛋白 G 的二氧化硅基質(zhì)超順磁珠。這種磁珠是經(jīng)過專門設計，并經(jīng)過嚴格質(zhì)量管理檢測的，主要用于當使用的一級抗體確定時，用于免疫沉淀和細胞分選。 同時，也被廣泛用于從血清樣品，腹水，血漿或組織培養(yǎng)上清中快速和有效的一步純化多個種類的IgG 蛋白。表1總結(jié)了本磁珠的結(jié)合親和力和特異性。

產(chǎn)品特點：

·適用于快捷，簡便的一步高通量程序;無需純化柱或過濾器，或者重復的移液或離心(Fig.1) ·由于磁珠的親水性表面，非特異性結(jié)合率極低

·結(jié)合容量

·對樣本體積要求低，便于自動化操作

·性價比高

產(chǎn)品屬性：

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緩沖液成分：

·.Protein G Beads (懸浮在 10 mM Tris, 0.15 M NaCl, 0.1% BSA,1 mM EDTA, pH7.4, 0.1% NaN3 緩沖液中) ·1x Protein G Binding/Washing Buffer (57.7 mM Na2HPO4,42.3 mM NaH2PO4, pH 7.0) ·1x Protein G Elution Buffer (0.2 M Glycine/HCl,pH 2.5) ·1x Protein G Neutralization Buffer (1.0 M Tris-HCl, pH 9.0)

所需耗材：

磁力分離器（適用于手動操作）：根據(jù)實驗時生物樣品的體積，使用者可以選擇以下不同型號的磁力分離器：8 孔磁力架可以容納 8 個單獨的 1.5-2.0 ml離心管; 24 孔磁力架可以容納 24 個單獨的 1.5-2.0 ml 離心管; 4 孔磁力-15 可以容納4 個單獨的15ml 離心管; 4 孔磁力架-50 可以容納四個單獨的 50 ml 離心管。

操作過程: 此過程可被等比例放大或縮小

提示：

1. 該方案是經(jīng)過優(yōu)化的，可用于純化來自不同來源的大多數(shù)IgG抗體。然而， 由于沒有兩種抗體相同，因此不可能為所有IgG純化設計一個通用試劑 盒。為了獲得結(jié)果，每個用戶必須根據(jù)故障排除部分中的建議，確定純 化單個抗體時的工作條件，尤其是弱結(jié)合抗體（見表1）。

2. 為確保離子強度和pH值的結(jié)合條件，有必要在純化前用Binding/ Washingbuffer按照至少1:1比例稀釋血清樣品、腹水或組織培養(yǎng)物。通 過離心或 0.2μ m過濾器過濾，去除樣品中的任何不溶性物質(zhì)。

3. 在純化IgG之前，用戶應將試劑盒中包含的所有試劑平衡至室溫。

一、模板DNA：PCR反應需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成         等生物學過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應特異性，從而提高反應效率；

六、酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標準，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達量很低）。選擇隨機引物時，鏈cDNA合成反應中就是以所有的RNA為模板，然后進行PCR反應時設計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng，可能會導致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長片段、全長產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補的引物。該引物需要結(jié)合目標RNA的已知序列進行設計。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當分析多種目標時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進行優(yōu)化。