原子分光度計(jì) 按數(shù)字[3]鍵進(jìn)入③Concentration (濃度測(cè)定模式或標(biāo)準(zhǔn)曲線模式),選中對(duì)應(yīng)的數(shù)字來(lái)設(shè)定條件(波長(zhǎng)數(shù)目,波長(zhǎng)數(shù)值,標(biāo)準(zhǔn)溶液數(shù)目及濃度),設(shè)定完畢后點(diǎn)擊[Enter]鍵確定,所有項(xiàng)目設(shè)定完畢后按數(shù)字[0]鍵確定,等待儀器調(diào)整至準(zhǔn)備狀態(tài),此時(shí)屏幕上出現(xiàn)AUTOZERO,將盛有空白溶液的比色皿放入樣品室中,按[Start/Stop] 鍵進(jìn)行零點(diǎn)的自動(dòng)調(diào)整,自動(dòng)調(diào)零完成后,將標(biāo)準(zhǔn)溶液置于光路中,按照濃度從低到高順序依次按[Start/Stop] 鍵進(jìn)行測(cè)量,
原子分光度計(jì)
物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng),以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測(cè)定其吸收度,即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見(jiàn)光區(qū),除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外,很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測(cè)定,故又稱比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測(cè)定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。
核酸的定量是分光光度計(jì)使用頻率高的功能。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的吸收峰的吸收波長(zhǎng)260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一,因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù)。如:1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。
測(cè)試后的吸光值經(jīng)過(guò)上述系數(shù)的換算,從而得出相應(yīng)的樣品濃度。測(cè)試前,選擇正確的程序,輸入原液和稀釋液的體積,爾后測(cè)試空白液和樣品液。然而,實(shí)驗(yàn)并非一帆風(fēng)順。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實(shí)驗(yàn)者頭痛的問(wèn)題。靈敏度越高的儀器,表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。