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目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>土壤系列>> 亞鐵氧化酶(HP)測試盒微量法

亞鐵氧化酶(HP)測試盒微量法
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參考價(jià) 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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更新時(shí)間:2023-12-13 11:56:58瀏覽次數(shù):392評(píng)價(jià)

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貨號(hào) BK-01S6957
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商品介紹:

測定意義:

Hephaestin (HP)作為銅藍(lán)蛋白的同系物,是近年來發(fā)現(xiàn)的鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白亞鐵氧化酶,HP屬亞鐵氧化酶家族成員,具有亞鐵氧化酶的活性,參與體內(nèi)鐵代謝。HP的表達(dá)可受鐵、銅及鋅等金屬離子的調(diào)節(jié)。HP催化Fe2+氧化生成Fe3+,在介導(dǎo)鐵的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)中有重要作用。

測定原理:

HP催化Fe2+氧化為Fe3+,Fe2+ferrozine反應(yīng)顯色,在560 nm下有特征吸光值。通過測定Fe2+的減少速率可測得亞鐵氧化酶的活性。

自備用品:

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測,7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測方法

貨號(hào)

亞鐵氧化酶(HP)測試盒微量法

100管/96樣

微量法

BK-01S6957

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實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招:

1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對(duì)照,與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。

操作步驟:

1. 樣品的準(zhǔn)備:

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對(duì)于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。

250mL Zinc-Fixative  Zinc-Fixative  常溫保存

10mL 去垢劑去除樹脂 Detergent Erasol Resin 常溫保存

2 ug pVL1392 pVL1392 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

500次 一管式植物DNAout One-Tube Plant DNAOUT 常溫

2 ug pET-3d pET-3d 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

10mL RNase-free 水 RNase-free Water 常溫

1瓶 95-D細(xì)胞株 95-D 低溫運(yùn)輸和保存

50T 豬瘟病毒RT-PCR試劑盒 Classical Swine Fever Virus RT-PCR Kit 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

25 T 超微量ATP測試盒(測Ca2+ATPase) Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

50mL Lithium Chloride Solution(氯化鋰溶液),1M  Lithium Chloride Solution,1M  常溫保存

50次 通用型RT-LAMP試劑盒 Universal RT-LAMP Kit -20℃保存

亞鐵氧化酶(HP)測試盒微量法Myt1  髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1抗體 規(guī)格: 0.2ml

THYN1  胸細(xì)胞核蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Hexokinase 3  己糖激3抗體 規(guī)格: 0.2ml

TSSC3  瘤抑制轉(zhuǎn)移候選基因3抗體 規(guī)格: 0.2ml

EGF  小鼠抗表皮生因子抗體 0.1ml

Septin 2/Sept2/NEDD5  神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)發(fā)育下調(diào)蛋白5抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-Goat IgG/Cy5  Cy5標(biāo)記的兔抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml

Neurexin 1  軸突蛋白1(Neurexin 1α)抗體 規(guī)格: 0.2ml

CD141/THBD  凝調(diào)節(jié)蛋白/栓調(diào)節(jié)素抗體 規(guī)格: 0.1ml

Collagen XI alpha 2  膠原蛋白11A2抗體 規(guī)格: 0.2ml

PSD95  突觸后密度蛋白95抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-NTRK2/TrkB (Tyr515)  磷酸化酪激B抗體 規(guī)格: 0.1ml

 


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